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4%组织/细胞固定液
ECOTOP货号:ES-8100-500ml(货期:现货)售价:¥110.00
4%组织/细胞固定液
【保存条件】 -20℃避光保存,有效期1年;4℃避光储存,有效期3个月。 【概述】 固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固,终止内源性或外源性酶反应,防止组织自溶或异溶,以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或弥散。固定液种类很多,常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。 多聚甲醛固定液是一种广泛用于免疫组化(IHC)、免疫荧光( IF)、免疫细胞化学(IC)、流式分析(FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。 本产品为4% 多聚甲醛PBS溶液(4% PFA),主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。其固定效果好、应用广,适用于各种常见细胞或组织的固定,对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果,但主要作用于蛋白质,无法固定尿酸和糖类等。 若需使用低浓度多聚甲醛,可使用PBS按比例稀释。 【使用建议】 对于细胞样品,去除培养液后,按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例,加入4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品,加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可,但固定较长时间,例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织切片,加入4% 多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准,或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定,但切片较厚时可以固定较长时间,例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织块样品,浸泡入4% 多聚甲醛固定液中,室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时,除非组织块特别大,难以渗透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每15-30分钟换一次水,共6-8次,建议在摇床进行,或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水,进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。 如将组织样品置于4% 多聚甲醛固定液中浸泡储存,请避光放置。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。 4. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。 5. 多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。 6. 多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。 7. 多聚甲醛固定液固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。 8. 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
RIPA裂解液 (高强度)
ECOTOP货号:ES-8148-100ml(货期:现货)售价:¥198.00
RIPA裂解液 (高强度)
【保存条件】 4℃保存,有效期1年。 【概述】 RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western和ELISA等。 RIPA的本意是Radio Immuno Precipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度RIPA裂解液。 【使用建议】 如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量,取每1ml RIPA加入10μl PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用(PMSF现用现加)。 1. 样品前处理: a) 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。 b) 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。 c) 对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 2. 后处理:将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀,可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 为保证最佳的使用效果,请尽量避免过多的反复冻融,可分装后使用。 4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行,根据需要添加不同抑制剂。 5. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 6. 该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

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