AO/PI双染色试剂盒使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 EK-5807 AO/PI Staining Kit 100T/500T 使用说明书 1份 【试剂盒组成】 产品编号 产品名称 100T 500T EK-5807A AO染色液 0.5ml 2.5ml EK-5807B PI 染色液 1ml 5ml EK-5801C 10×染色缓冲液 10ml 50ml 【保存条件】 4℃避光保存有效期6个月，-20℃避光保存有效期12个月 【概述】 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm)，绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。 【使用方法（仅供参考）】 1. 染色缓冲液及工作液的配制： ①　根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL10×染色缓冲液加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成1×染色缓冲液。 ①　每500μL1×染色缓冲液加入5μL AO染色液和10μL PI染色液，充分混匀，即成染色工作液。 注：不同细胞样本的染色浓度和时间有差异，可以根据预实验结果调整染色液浓度。以上条件适合大多数细胞样本。 2. 悬浮细胞染色 ①　收集样本细胞，细胞数量在10×105个以内。 ②　用PBS洗涤细胞两次。 ③　用500μL染色工作液将细胞重悬。 ④　轻轻混匀后4℃避光孵育10～20分钟。 ⑤　用PBS洗涤细胞。 ⑥　用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。 3. 贴壁细胞原位染色 ①　用PBS洗涤细胞两次。 ②　注意洗细胞过程不要丢失细胞，需要离心收集漂浮细胞。 ③　细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。 ④　37℃孵育细胞10～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。（若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。）⑤　吸干染色工作液，用培养基洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。 4. 结果分析： ①　在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检： ②　AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。 ③　当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。坏死细胞呈强红色荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

AO/PI双染色试剂盒使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 EK-5807 AO/PI Staining Kit 100T/500T 使用说明书 1份 【试剂盒组成】 产品编号 产品名称 100T 500T EK-5807A AO染色液 0.5ml 2.5ml EK-5807B PI 染色液 1ml 5ml EK-5801C 10×染色缓冲液 10ml 50ml 【保存条件】 4℃避光保存有效期6个月，-20℃避光保存有效期12个月 【概述】 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm)，绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。 【使用方法（仅供参考）】 1. 染色缓冲液及工作液的配制： ①　根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL10×染色缓冲液加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成1×染色缓冲液。 ①　每500μL1×染色缓冲液加入5μL AO染色液和10μL PI染色液，充分混匀，即成染色工作液。 注：不同细胞样本的染色浓度和时间有差异，可以根据预实验结果调整染色液浓度。以上条件适合大多数细胞样本。 2. 悬浮细胞染色 ①　收集样本细胞，细胞数量在10×105个以内。 ②　用PBS洗涤细胞两次。 ③　用500μL染色工作液将细胞重悬。 ④　轻轻混匀后4℃避光孵育10～20分钟。 ⑤　用PBS洗涤细胞。 ⑥　用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。 3. 贴壁细胞原位染色 ①　用PBS洗涤细胞两次。 ②　注意洗细胞过程不要丢失细胞，需要离心收集漂浮细胞。 ③　细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。 ④　37℃孵育细胞10～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。（若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。）⑤　吸干染色工作液，用培养基洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。 4. 结果分析： ①　在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检： ②　AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。 ③　当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。坏死细胞呈强红色荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年【概述】5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。溴酚蓝作为指示剂，用于追踪电泳进度。【使用建议】1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(五倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。【注意事项】1. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。2. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】室温保存,有效期一年【概述】细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。本抗原修复液含有了广泛使用的SDS等抗原修复试剂等，pH值约为7.4，可以快速有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。【操作方法】1. 对于石蜡切片: a. 脱蜡:切片在二甲苯中脱蜡5分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3次。无水乙醇5分钟，两次。90%乙醇5 分钟，两次，70%乙醇5分钟，一次。蒸馏水5分钟，两次。 b. 抗原修复:用重蒸水或Milli-Q水将本抗原修复液(5×)稀释5倍，配制成抗原修复液(1×)，例如1ml本抗原修复液(5×)加入 4ml去离子水混合均匀，即得5ml抗原修复液(1×)。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，室温孵育5分钟。用免疫染色洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，以充分去除残留的SDS等试剂。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 2. 对于冰冻切片: 用免疫染色洗涤液洗涤切片5分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，室温孵育约5分钟。用免疫染色洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，以充分去除残留的SDS等试剂。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 3. 对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。【注意事项】1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 低温储存后可能会有析出，若出现析出或沉淀，可适当加热即溶解，不影响使用效果。

【保存条件】室温保存,有效期一年【概述】细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。本抗原修复液含有了广泛使用的SDS等抗原修复试剂等，pH值约为7.4，可以快速有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。【操作方法】1. 对于石蜡切片: a. 脱蜡:切片在二甲苯中脱蜡5分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3次。无水乙醇5分钟，两次。90%乙醇5 分钟，两次，70%乙醇5分钟，一次。蒸馏水5分钟，两次。 b. 抗原修复:用重蒸水或Milli-Q水将本抗原修复液(5×)稀释5倍，配制成抗原修复液(1×)，例如1ml本抗原修复液(5×)加入 4ml去离子水混合均匀，即得5ml抗原修复液(1×)。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，室温孵育5分钟。用免疫染色洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，以充分去除残留的SDS等试剂。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 2. 对于冰冻切片: 用免疫染色洗涤液洗涤切片5分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，室温孵育约5分钟。用免疫染色洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟，以充分去除残留的SDS等试剂。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。 3. 对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。【注意事项】1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。2. 低温储存后可能会有析出，若出现析出或沉淀，可适当加热即溶解，不影响使用效果。

【保存条件】 4℃保存，有效期1年。 【概述】 本溶液由0.2M NaHCO3、0.05N NaOH、200mM HEPES组成，经过滤除菌，可用于细胞等相关实验。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 该试剂仅用于科研领域，不得用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 室温（15–25°C）保存12个月, 2–8°C或–20°C保存24个月 【概述】 TripleSelect与胰蛋白酶一样，可裂解赖氨酸和精氨酸C-末端上的肽键。但是，TripleSelect无与伦比的纯度提高了特异性，其原因在于只有一种酶发挥作用。这减少了胰蛋白酶和其他提取物中存在的多种酶的裂解作用造成的损害。 【产品特点】 l 对细胞作用温和：纯度提高了特异性，其原因在于只有一种酶发挥作用。这减少了胰蛋白酶和其他提取物中由于多种酶切割造成的损害。l 在室温下保持稳定：在室温或4°C下可保持稳定12-24个月，因此易于储存和处理、方便快捷。 l 无动物来源蛋白：与常用猪胰蛋白酶不同，本试剂不含动物来源成分。 l 无需终止，易于使用：无需使用胰蛋白酶抑制剂（如 FBS）终止消化，PBS或DMEM等稀释后自动失活。 【使用建议】 1. 使用前将TripleSelect 和完整的生长培养基恢复至室温。2. 将待消化细胞培养器皿中培养去除。 3. 使用DPBS（无钙镁）清洗细胞，清洗完去除DPBS液体。 4. 加入相应体积的TripleSelect消化液（如25cm2瓶中加入1-2ml TripleSelect消化液，75cm2瓶中加入5ml TripleSelect消化液） 5. 37°C孵育至细胞变圆脱落（镜下观察），可轻拍培养瓶/皿。 6. 加入5ml 完全培养基至培养瓶/皿（体积根据不同面积培养瓶/皿），可轻轻吹打使细胞更好分离。 7. 将含细胞的液体移入15ml无菌离心管中。以200-500g转速离心5-10分钟使细胞沉淀。 8. 去除上清后，加入含血清的完全培养液使细胞沉淀重新悬浮，即可用于后续实验【注意事项】 1. 注意无菌操作，尽量避免污染。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】室温避光储存，有效期1年。【概述】苏木素染色也被称作苏木精染色，是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein)，从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中，双链上的磷酸基团向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合，从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法，不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。本试剂为Hematoxylin, Mayer's (Lillie's Modification)，是一种渐进式的核苏木精染色剂，具有多种组织学应用。细胞核染色强、干净、清晰，无需分化。苏木素染色后细胞核呈现蓝色。【使用建议】1.样品处理a.对于石蜡切片：二甲苯（自备）中脱蜡5-10分钟；换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟；无水乙醇浸泡5分钟；90%乙醇浸泡2分钟；80%乙醇浸泡2分钟；70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。b.对于冰冻切片：固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。c.对于培养细胞：固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。2.苏木素染色对于上述处理好的样品：a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，根据组织大小和厚度进行调整)。b.蒸馏水洗去浮色，用自来水中冲洗去多余的染色液，约10分钟。c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。d.选做：根据不同分化液（自备）的分化时间，分化约2-30秒，自来水冲洗10分钟。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。3.脱水、透明、封片观察70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色。【注意事项】1. 染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。2. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。3. 染色后的分化为选做步骤，但分化后细胞核着色更清晰。4. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】室温避光储存，有效期1年。【概述】苏木素染色也被称作苏木精染色，是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein)，从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中，双链上的磷酸基团向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合，从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法，不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。本试剂为Hematoxylin, Mayer's (Lillie's Modification)，是一种渐进式的核苏木精染色剂，具有多种组织学应用。细胞核染色强、干净、清晰，无需分化。苏木素染色后细胞核呈现蓝色。【使用建议】1.样品处理a.对于石蜡切片：二甲苯（自备）中脱蜡5-10分钟；换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟；无水乙醇浸泡5分钟；90%乙醇浸泡2分钟；80%乙醇浸泡2分钟；70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。b.对于冰冻切片：固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。c.对于培养细胞：固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。2.苏木素染色对于上述处理好的样品：a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，根据组织大小和厚度进行调整)。b.蒸馏水洗去浮色，用自来水中冲洗去多余的染色液，约10分钟。c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。d.选做：根据不同分化液（自备）的分化时间，分化约2-30秒，自来水冲洗10分钟。此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。3.脱水、透明、封片观察70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色。【注意事项】1. 染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。2. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。3. 染色后的分化为选做步骤，但分化后细胞核着色更清晰。4. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】-20℃避光保存，有效期1年；4℃避光保存，有效期1个月【概述】细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色 (Propidium staining，即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基对之间实现与双链DNA结合。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链 DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布 情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。 碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。 Ø细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。 Ø本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测，每个样品的细胞数量可以为10-100万。【使用方法（仅供参考）】1. 细胞样品的准备：a. 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时， 加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。 b. 对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击 离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。2. 细胞固定：加入1毫升冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4ºC固定30分钟或更长时间。通常固定2小时或以上更能保证染色效果，固定12-24小时可能效果更佳。1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的 PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。3. 碘化丙啶染色混合液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液： 1个样品6个样品12个样品染色缓冲液0.5ml3ml6mlPI染色液（20×）25μl150μl300μlRNase溶液（50×）10μl60μl120μl总体积0.535ml3.21ml6.42ml4. 染色：每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色混合液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37ºC避光温浴30分钟。随后可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。5. 流式检测和分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞 DNA含量分析和光散射分析。【注意事项】1. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光以减缓荧光淬灭。2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。3. 仅用于实验室研究，不适合农业/家庭/临床用途使用。