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细胞膜/细胞质/细胞核蛋白提取试剂盒
ECOTOP核酸提取试剂盒货号:EK-6005-100T(货期:现货)售价:¥799.00
细胞膜/细胞质/细胞核蛋白提取试剂盒
【保存条件】-20℃保存一年【操作方法】A: 对于贴壁细胞:用 PBS 洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。(注:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。)B: 对于悬浮细胞:用预冷的 PBS 清洗一遍,离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。C: 对于组织:建议先用将组织剪成小块,然后使用匀浆器加入预冷缓冲液 C 匀浆(冰上处理)。注意:手动方法可能适用于某些软组织,例如大脑。1. 从组织/细胞中提取各组分蛋白①使用前在 Buffer C、N、M 中加入蛋白酶抑制剂(磷酸化研究则需同时添加磷酸酶抑制剂,现配现用)。②收集细胞,建议数量量 5-10×10 6个细胞,加入 240μl 移液预冷缓冲液 C(含抑制剂)。如有必要,可以增加使用更多缓冲液 C。不建议降低使用量,因为如果溶液变得太稠,这将影响细胞成分的分离。组织量最小不小于 40mg(每 g组织加入约 2ml 预冷缓冲液 C),太小的组织蛋白提取出来后浓度过低。③通过涡旋使细胞充分分散,持续 20 秒或至细胞完全分散。若细胞贴壁过紧无法涡旋分散则用移液器吹打至均匀,组织则加入缓冲液 C 后低温匀浆至完全均质化。④在 4°C 下孵育混合物 10 分钟(震荡孵育有助于更好裂解)。⑤将混合物在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。吸出上清液并将其保存到另一个干净离心管中,上清液即为细胞质蛋白。沉淀包含膜、细胞核部分,放在冰上继续后续操作。离心转速越高越利于分离,离心时间亦可延长至 20 分钟。⑥加入 300μl 预冷缓冲液 C(无需蛋白酶抑制剂等)洗涤并重悬沉淀。每克组织加入 1.5ml 预冷缓冲液 C 清洗。⑦在 4°C 下孵育混合物 5 分钟(震荡孵育有助于更好清洗)。本步骤主要目的是清洗,低温下有利于蛋白稳定。⑧在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃,必要时用纸巾擦拭管子的边缘。该洗涤步骤仅有助于减少与细胞质蛋白的交叉污染,如果需要,可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。⑨向沉淀中加入 100μl 预冷缓冲液 N,并从上一步骤中重悬沉淀。⑩在 4°C 下孵育混合物 10 分钟(震荡孵育有助于更好裂解)。11.在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个离心管中,核蛋白位于该上清液中。剩余含膜蛋白沉淀离心管放在冰上,继续下游操作。12. 用每克组织 300μl 预冷缓冲液 C(无需蛋白酶抑制剂等)洗涤并重悬沉淀。本步骤主要目的是清洗,低温下有利于蛋白稳定。13. 在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃,必要时用纸巾擦拭管子的边缘。该洗涤步骤仅有助于减少与细胞核蛋白的交叉污染,如果需要,可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。14. 向沉淀中加入每克组织 100μl 预冷缓冲液 M 并重悬。15. 在 4°C 下摇床震荡轻轻混合混合物 20 分钟(可增加超声 10 秒促溶解)。建议增加超声过程有助于膜蛋白的溶解,10 秒每次,可多次超声。16. 在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个离心管中,膜蛋白位于该上清液中。【注意事项】1. 该产品仅实验室使用,不适合农业/家庭/临床用途使用。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞膜/细胞质/细胞核蛋白提取试剂盒
ECOTOP核酸提取试剂盒货号:EK-6005-50T(货期:现货)售价:¥550.00
细胞膜/细胞质/细胞核蛋白提取试剂盒
【保存条件】-20℃保存一年【操作方法】A: 对于贴壁细胞:用 PBS 洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。(注:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。)B: 对于悬浮细胞:用预冷的 PBS 清洗一遍,离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。C: 对于组织:建议先用将组织剪成小块,然后使用匀浆器加入预冷缓冲液 C 匀浆(冰上处理)。注意:手动方法可能适用于某些软组织,例如大脑。1. 从组织/细胞中提取各组分蛋白①使用前在 Buffer C、N、M 中加入蛋白酶抑制剂(磷酸化研究则需同时添加磷酸酶抑制剂,现配现用)。②收集细胞,建议数量量 5-10×106个细胞,加入 240μl 移液预冷缓冲液 C(含抑制剂)。如有必要,可以增加使用更多缓冲液 C。不建议降低使用量,因为如果溶液变得太稠,这将影响细胞成分的分离。组织量最小不小于 40mg(每 g组织加入约 2ml 预冷缓冲液 C),太小的组织蛋白提取出来后浓度过低。③通过涡旋使细胞充分分散,持续 20 秒或至细胞完全分散。若细胞贴壁过紧无法涡旋分散则用移液器吹打至均匀,组织则加入缓冲液 C 后低温匀浆至完全均质化。④在 4°C 下孵育混合物 10 分钟(震荡孵育有助于更好裂解)。⑤将混合物在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。吸出上清液并将其保存到另一个干净离心管中,上清液即为细胞质蛋白。沉淀包含膜、细胞核部分,放在冰上继续后续操作。离心转速越高越利于分离,离心时间亦可延长至 20 分钟。⑥加入 300μl 预冷缓冲液 C(无需蛋白酶抑制剂等)洗涤并重悬沉淀。每克组织加入 1.5ml 预冷缓冲液 C 清洗。⑦在 4°C 下孵育混合物 5 分钟(震荡孵育有助于更好清洗)。本步骤主要目的是清洗,低温下有利于蛋白稳定。⑧在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃,必要时用纸巾擦拭管子的边缘。该洗涤步骤仅有助于减少与细胞质蛋白的交叉污染,如果需要,可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。⑨向沉淀中加入 100μl 预冷缓冲液 N,并从上一步骤中重悬沉淀。⑩在 4°C 下孵育混合物 10 分钟(震荡孵育有助于更好裂解)。11.在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个离心管中,核蛋白位于该上清液中。剩余含膜蛋白沉淀离心管放在冰上,继续下游操作。12. 用每克组织 300μl 预冷缓冲液 C(无需蛋白酶抑制剂等)洗涤并重悬沉淀。本步骤主要目的是清洗,低温下有利于蛋白稳定。13. 在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃,必要时用纸巾擦拭管子的边缘。该洗涤步骤仅有助于减少与细胞核蛋白的交叉污染,如果需要,可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。14. 向沉淀中加入每克组织 100μl 预冷缓冲液 M 并重悬。15. 在 4°C 下摇床震荡轻轻混合混合物 20 分钟(可增加超声 10 秒促溶解)。建议增加超声过程有助于膜蛋白的溶解,10 秒每次,可多次超声。16. 在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个离心管中,膜蛋白位于该上清液中。【注意事项】1. 该产品仅实验室使用,不适合农业/家庭/临床用途使用。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)
ECOTOP核酸提取试剂盒货号:EK-5004(货期:现货)售价:¥380.00
Bradford 蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)
【保存条件】4℃保存,有效期 1 年【概述】考马斯亮兰 G-250 染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm 变为 595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。本试剂盒和常规的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒相比可以兼容一系列常见的去垢剂,和 BCA 法相比,能兼容高浓度的还原剂,并且检测速度极快,在检测含去垢剂样品蛋白浓度时,比 BCA 法更加便捷。生命科学研究中的很多蛋白样品都是含有去垢剂的,因此常规Bradford 法的使用受到了很大的限制,通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的 BCA法。如果使用本试剂盒,不仅 能兼容去垢剂,而且由于能立即显色,检测速度会比 BCA 法快很多。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时,常规的 Bradford 法和 BCA法就都不能使用了,而本试剂盒仍然是可以检测的。本试剂盒测定蛋白浓度时不受较高浓度去垢剂的影响,可以很好地兼容 1% Triton X-100、1% Tween 20、1% SDS、1% NP-40 和 1% Brij35 等去垢剂。本试剂盒检测灵敏度高,最小蛋白检测量达到 0.5μg。【使用方法】1. 蛋白标准液的准备a. 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用 0.9%NaCl、PBS 或水稀释标准品。蛋白标准液(20mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。b. 按照下表配制 0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml 蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml 的蛋白标准。2. 蛋白浓度测定a. 取 10µl 不同浓度蛋白标准加到 96 孔板的蛋白标准孔中。b. 取 10µl 样品到 96 孔板的样品孔中。如果样品不足 10µl,需加标准品稀释液补足到 10µl。请注意记录样品体积。c. 各孔加入 250µl G250 染色液。d. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在最长 2 小时内测定,一般来说 2 小时内检测数据无显著变化。e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。【注意事项】1. 本品 BSA 因每次使用量较小,推荐分装使用。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
0.25%胰酶溶液(含EDTA,含酚红)
ECOTOP细胞培养试剂货号:ES-8439-500ml(货期:现货)售价:¥320.00
0.25%胰酶溶液(含EDTA,含酚红)
【保存条件】 -20℃保存,有效期2年 【概述】 0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA)含0.25%胰酶、EDTA和酚红,pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。 【使用建议(仅供参考)】 1. 贴壁细胞的消化:a.吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。b.加入少量0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA),略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。2. 组织的消化:a.不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】 1. 胰酶消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。 2. 注意无菌操作,尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
AO/PI双染色试剂盒-100T
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5807-100T(货期:1天)售价:¥260.00
AO/PI双染色试剂盒-100T
AO/PI双染色试剂盒使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 EK-5807 AO/PI Staining Kit 100T/500T 使用说明书 1份 【试剂盒组成】 产品编号 产品名称 100T 500T EK-5807A AO染色液 0.5ml 2.5ml EK-5807B PI 染色液 1ml 5ml EK-5801C 10×染色缓冲液 10ml 50ml 【保存条件】 4℃避光保存有效期6个月,-20℃避光保存有效期12个月 【概述】 吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种荧光染料,该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm,吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为488nm和630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。 【使用方法(仅供参考)】 1. 染色缓冲液及工作液的配制: ① 根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL10×染色缓冲液加900μL无菌去离子水稀释,混匀即成1×染色缓冲液。 ① 每500μL1×染色缓冲液加入5μL AO染色液和10μL PI染色液,充分混匀,即成染色工作液。 注:不同细胞样本的染色浓度和时间有差异,可以根据预实验结果调整染色液浓度。以上条件适合大多数细胞样本。 2. 悬浮细胞染色 ① 收集样本细胞,细胞数量在10×105个以内。 ② 用PBS洗涤细胞两次。 ③ 用500μL染色工作液将细胞重悬。 ④ 轻轻混匀后4℃避光孵育10~20分钟。 ⑤ 用PBS洗涤细胞。 ⑥ 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。 3. 贴壁细胞原位染色 ① 用PBS洗涤细胞两次。 ② 注意洗细胞过程不要丢失细胞,需要离心收集漂浮细胞。 ③ 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。 ④ 37℃孵育细胞10~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。(若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。)⑤ 吸干染色工作液,用培养基洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,然后吸干培养基。 4. 结果分析: ① 在荧光显微镜下,选用488nm激发光镜检: ② AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色,形态结构正常。 ③ 当细胞凋亡时,染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染。坏死细胞呈强红色荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
AO/PI双染色试剂盒-500T
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5807-500T(货期:1天)售价:¥890.00
AO/PI双染色试剂盒-500T
AO/PI双染色试剂盒使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 EK-5807 AO/PI Staining Kit 100T/500T 使用说明书 1份 【试剂盒组成】 产品编号 产品名称 100T 500T EK-5807A AO染色液 0.5ml 2.5ml EK-5807B PI 染色液 1ml 5ml EK-5801C 10×染色缓冲液 10ml 50ml 【保存条件】 4℃避光保存有效期6个月,-20℃避光保存有效期12个月 【概述】 吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种荧光染料,该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm,吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为488nm和630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。 【使用方法(仅供参考)】 1. 染色缓冲液及工作液的配制: ① 根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL10×染色缓冲液加900μL无菌去离子水稀释,混匀即成1×染色缓冲液。 ① 每500μL1×染色缓冲液加入5μL AO染色液和10μL PI染色液,充分混匀,即成染色工作液。 注:不同细胞样本的染色浓度和时间有差异,可以根据预实验结果调整染色液浓度。以上条件适合大多数细胞样本。 2. 悬浮细胞染色 ① 收集样本细胞,细胞数量在10×105个以内。 ② 用PBS洗涤细胞两次。 ③ 用500μL染色工作液将细胞重悬。 ④ 轻轻混匀后4℃避光孵育10~20分钟。 ⑤ 用PBS洗涤细胞。 ⑥ 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。 3. 贴壁细胞原位染色 ① 用PBS洗涤细胞两次。 ② 注意洗细胞过程不要丢失细胞,需要离心收集漂浮细胞。 ③ 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。 ④ 37℃孵育细胞10~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。(若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。)⑤ 吸干染色工作液,用培养基洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,然后吸干培养基。 4. 结果分析: ① 在荧光显微镜下,选用488nm激发光镜检: ② AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色,形态结构正常。 ③ 当细胞凋亡时,染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染。坏死细胞呈强红色荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(含SDS,无还原剂)
ECOTOP常用生化试剂货号:ED-9431售价:¥220.00
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(含SDS,无还原剂)
【保存条件】建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期1年【概述】5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。溴酚蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。【使用建议】1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(五倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。【注意事项】1. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于37℃水浴促溶。2. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
EasyLys-I 昆虫活性蛋白提取试剂
ECOTOP蛋白质/抗原/多肽/酶货号:ES-6225售价:¥338.00
EasyLys-I 昆虫活性蛋白提取试剂
【保存条件】 4℃保存,一年有效。室温保存,至少2周内有效。-20℃可以保存更长时间。 【概述】 本产品能够快速、温和、有效地抽提昆虫细胞或组织的总蛋白,抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性,可用于多种生物化学和细胞生物学用途。例如,带有His、GST、HA、Flag、Myc、V5等标签蛋白的分离纯化,免疫印迹(Western blot)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)和ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)等常规生化分析,luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等报告基因(Report gene)酶活性检测,PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的检测等方面的用途。 【操作方法】 1. 溶液的准备 取适量的昆虫活性蛋白抽提试剂,根据具体实验目的加入适量的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物。放置于冰浴备用。 2. 悬浮培养昆虫细胞的蛋白抽提 a. 收集细胞:对细胞进行计数,并确定总的细胞数。800g室温离心5min,弃上清。 b. 洗涤细胞(可选做):用PBS洗涤细胞,800g室温离心5min,弃上清。如有必要,可以再重复洗涤一次。 c. 裂解细胞:弹击离心管底,使细胞沉淀适当分散开。每0.5-2×107个细胞加入冰浴预冷的1ml 昆虫活性蛋白抽提试剂,用移液器吹打混匀,再以中速涡悬震荡约5秒后置于冰上孵育10min。如果希望获得更多的蛋白,或者对于一些较难裂解提取的蛋白,则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间,可能会增加蛋白得率。 d. 12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃离心15min。 e. 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中,立即用于后续分析检测,或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要,可以考虑保留沉淀物用于后续分析。 3. 贴壁培养昆虫细胞的蛋白抽提 a. 洗涤细胞(可选做):吸除培养液,加入适量PBS,轻轻摇动,吸除PBS重复洗涤一次。如有必要,可以再重复洗涤一次。 洗涤过程中应尽量避免贴壁细胞的脱落,如果发生细胞脱落,可以收集相应的培养液或PBS溶液,800g离心5min,以沉淀并收集脱落的细胞。 b. 裂解细胞:吸净细胞培养液或洗涤液,参考下表,加入适量的昆虫活性蛋白抽提试剂,冰上孵育10min。冰上孵育期间,可以将培养器皿放置在水平或侧摆摇床上剧烈摇动、敲击细胞培养瓶细胞培养侧的外壁或用细胞刮刮下贴壁细胞。通常直接孵育5-6min后,昆虫细胞会逐渐出现从培养器皿表面脱落的现象。 培养板/皿 表面积(cm2) 裂解液用量(μl) 10-cm dish 55 500-1000 6-cm dish 21 200-400 6孔板 9.5 100-200 12孔板 3.8 50-100 24孔板 1.9 25-50 48孔板 0.95 12.5-25 96孔板 0.32 5-10 c. 用移液器将细胞抽提产物吹打悬起并转移到离心管中,12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃离心15min。 d. 将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中,立即用于后续分析检测,或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要,可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等 【注意事项】 1. 该产品仅实验室使用,不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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