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产品细节图:

细胞膜/细胞质/细胞核蛋白提取试剂盒

品牌：ECOTOP | 货号：EK-6005-100T(货期：现货)
  • 所属大类 : 蛋白类试剂
  • 所属小类 : 核酸提取试剂盒
  • 品牌 : ECOTOP
  • 规格 : 100T
  • 原价 : ￥799.00
  • 促销价 : ￥799.00
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    【保存条件】
    -20℃保存一年
    【操作方法】
    A: 对于贴壁细胞：用 PBS 洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用 EDTA 溶液处理细胞使细胞
    不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉
    淀备用。（注：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。）
    B: 对于悬浮细胞：用预冷的 PBS 清洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细
    胞沉淀备用。
    C: 对于组织：建议先用将组织剪成小块，然后使用匀浆器加入预冷缓冲液 C 匀浆（冰上处
    理）。注意：手动方法可能适用于某些软组织，例如大脑。
    1. 从组织/细胞中提取各组分蛋白
    ①使用前在 Buffer C、N、M 中加入蛋白酶抑制剂(磷酸化研究则需同时添加磷酸酶抑制
    剂，现配现用)。
    ②收集细胞，建议数量量 5-10×10 6个细胞，加入 240μl 移液预冷缓冲液 C（含抑制剂）。
    如有必要，可以增加使用更多缓冲液 C。不建议降低使用量，因为如果溶液变得太稠，这将影响细胞成分的分离。组织量最小不小于 40mg（每 g
    组织加入约 2ml 预冷缓冲液 C），太小的组织蛋白提取出来后浓度过低。
    ③通过涡旋使细胞充分分散，持续 20 秒或至细胞完全分散。
    若细胞贴壁过紧无法涡旋分散则用移液器吹打至均匀，组织则加入缓冲液 C 后低温匀浆至完全均质化。
    ④在 4°C 下孵育混合物 10 分钟（震荡孵育有助于更好裂解）。
    ⑤将混合物在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。吸出上清液并将其保存
    到另一个干净离心管中，上清液即为细胞质蛋白。
    沉淀包含膜、细胞核部分，放在冰上继续后续操作。离心转速越高越利于分离，离心时间亦可延长至 20 分钟。
    ⑥加入 300μl 预冷缓冲液 C（无需蛋白酶抑制剂等）洗涤并重悬沉淀。
    每克组织加入 1.5ml 预冷缓冲液 C 清洗。
    ⑦在 4°C 下孵育混合物 5 分钟（震荡孵育有助于更好清洗）。
    本步骤主要目的是清洗，低温下有利于蛋白稳定。
    ⑧在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃，
    必要时用纸巾擦拭管子的边缘。
    该洗涤步骤仅有助于减少与细胞质蛋白的交叉污染，如果需要，可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。
    ⑨向沉淀中加入 100μl 预冷缓冲液 N，并从上一步骤中重悬沉淀。
    ⑩在 4°C 下孵育混合物 10 分钟（震荡孵育有助于更好裂解）。
    11.在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个
    离心管中，核蛋白位于该上清液中。
    剩余含膜蛋白沉淀离心管放在冰上，继续下游操作。
    12. 用每克组织 300μl 预冷缓冲液 C（无需蛋白酶抑制剂等）洗涤并重悬沉淀。
    本步骤主要目的是清洗，低温下有利于蛋白稳定。
    13. 在 4°C 下再次以最高转速或 13,000 g 转速下离心 10 分钟。小心地倒掉上清液并丢弃，
    必要时用纸巾擦拭管子的边缘。
    该洗涤步骤仅有助于减少与细胞核蛋白的交叉污染，如果需要，可以重复多一次该步骤以减少交叉污染。
    14. 向沉淀中加入每克组织 100μl 预冷缓冲液 M 并重悬。
    15. 在 4°C 下摇床震荡轻轻混合混合物 20 分钟（可增加超声 10 秒促溶解）。
    建议增加超声过程有助于膜蛋白的溶解，10 秒每次，可多次超声。
    16. 在 4°C 下以最高转速或 13,000 g 离心 10 分钟。取出上清液并将其保存到另一个离心管
    中，膜蛋白位于该上清液中。
    【注意事项】
    1. 该产品仅实验室使用，不适合农业/家庭/临床用途使用。
    2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者：Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子：4.259
    期刊：《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID：27353337

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