ECOTOP缓冲液货号:ED-8467-lml×5(货期:现货)售价:¥460.00
寡核苷酸退火缓冲液Annealing Buffer, 10×, 1ml×5管
【保存条件】 -20 ℃保存,有效期12个月 【概述】 本品适用于小片段(5-500bp)单链 DNA 的杂交反应,获得更优质的杂交双链DNA片段,如shRNA、gRNA载体等构建。 【操作方法】 I.体系配制(如下20 µl体系为例) Reagent试剂 Amount 试剂量 正链Oligo(10μM) 负链Oligo(10μM) ddH2O Annealing Buffer(10x) 5μl 5μl 8 μl 2μl 20μl II. 退火条件 A. 水浴锅或Heat Block 1.在微管中混合等体积的等摩尔寡核苷酸。 2.将微管在95°C下孵育5分钟。 3.让微管缓慢冷却至室温(注:若水浴等水温升至最高后加入,勿中途取出)。 B. PCR(热循环)仪(可选择简易步骤或进阶步骤的其中一种使用) Cycles Temperature Time Simple Protocol 简易步骤 Step 1: 1 95°C 5 min Step 2: 70 95°C (-1°C/cycle ) 1 min Step 3: 4°C HOLD Cycles Temperature Time Advanced Protocol 进阶操作步骤 (以Tm值55°C为例) Step 1: 1 95°C 5 min Step 2: 40* 95°C (-1°C/cycle ) 1 min Step 3: 1 55°C 30min Step 4: 20 55°C* (-1°C/cycle ) 1min Step 5: 4°C HOLD *步骤2和4中的循环数取决于要退火的寡核苷酸的Tm。 【注意事项】 1. 如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用,以免污染。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。