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NP-40 Lysis buffer 裂解液-100ml
ECOTOP常用生化试剂货号:ES-8140-100ml(货期:现货)售价:¥170.00
NP-40 Lysis buffer 裂解液-100ml
【保存条件】 -20ºC保存,一年有效 【概述】 NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。 【操作方法】 1. 对于培养细胞样品: a. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。b. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。对于悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。对于细菌或酵母:对于1ml菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用PBS洗涤一次,充分去除液体后,轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2-4mg/ml,不同细胞有所不同。c. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。2. 对于组织样品:a. 把组织剪切成细小的碎片。b. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。c. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)d. 用玻璃匀浆器匀浆或组织研磨仪研磨,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。e. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/ml,不同状态的不同组织有所不同。f. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 3. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
蛋白酶抑制剂混合物Cocktail(通用型, 100×)-1ml
ECOTOP常用生化试剂货号:ES-8135-1ml(货期:现货)售价:¥299.00
蛋白酶抑制剂混合物Cocktail(通用型, 100×)-1ml
【保存条件】 -20°C保存,有效期1年 【使用建议】 细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。 本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物,包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。主要由 Leupetin、Pepstatin A、Aprotinin、E-64 等组成。该混合物可以抑制绝大多数蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白 酶、木瓜蛋白酶等。该蛋白酶抑制剂混合液是100×的浓缩的DMSO溶液,适用于从哺乳动物组织、 细胞中提取蛋白质,能够更有效的获得目的蛋白质。提取出来的蛋白可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。 另配EDTA为单独包装,以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA。 【使用建议】 1. 本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液,使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如,1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)(若需加入EDTA也是1:100比例加入裂解液中),混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配,不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途,不得用于临床或诊断相关研究; 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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