ECOTOP货号:EK-5103-10000T(货期:现货)售价:¥2800.00
CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)-10000T
【保存条件】 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒,可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法(仅供参考)】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定,推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要,进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液(如果起始的培养体积为200μl,则需加入20μl CCK-8溶液,其它情况以此类推)。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内(37°C)继续孵育0.5-4小时,对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab:空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定,增加OD值;在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生,减小OD值;在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时,如果药物具有还原性,就会和CCK- 8试剂发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK- 8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK- 8之前更换培养基,去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。