亿涛生物(QQ:304215136)         电话:15622108587         邮箱:info@ecotopbio.com ON OFF

产品细节图:

NP-40 Lysis buffer 裂解液-100ml

品牌:ECOTOP | 货号:ES-8140-100ml(货期:现货)
  • 所属大类 : 蛋白类试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : ECOTOP
  • 规格 : 100ml
  • 原价 : ¥170.00
  • 促销价 : ¥170.00
  • -
    +

    【保存条件】

    -20ºC保存,一年有效

    概述

    NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGEWestern、免疫沉淀(immunol precipitationIP)、免疫共沉淀(co-IP)ELISA等。
    本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品,也可以用于真菌或细菌样品。

    【操作方法】

    1. 对于培养细胞样品:

    a. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
    b. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min
    对于悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
    对于细菌或酵母:对于1ml菌液或酵母液,离心去上清,如果有必要可以使用PBS洗涤一次,充分去除液体后,轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解。
    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2-4mg/ml,不同细胞有所不同。
    c. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
    2. 对于组织样品:
    a. 把组织剪切成细小的碎片。
    b. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM,或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
    c. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
    d. 用玻璃匀浆器匀浆或组织研磨仪研磨,直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。
    e. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/ml,不同状态的不同组织有所不同。
    f. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。

    【注意事项】

    1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

    3. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。


    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

    用户名:   (可为空)
    E-mail:   *(必填)
    评价等级:
    评论内容:   *(必填)

    高质量生物试剂供应商

    销售热线:15622108587

    地址:广东省广州市广州国际企业孵化器D座512室 销售热线:15622108587

    ©2016  亿涛生物 版权所有  粤ICP备20058672号 网站建设服务商 学智