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产品细节图:

BCA蛋白浓度测定试剂盒-500T

品牌:ECOTOP | 货号:EK-5001-500T(货期:现货)
  • 所属大类 : 蛋白类试剂
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : ECOTOP
  • 规格 : 500T
  • 原价 : ¥390.00
  • 促销价 : ¥390.00
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    【保存条件】

    室温避光保存有效期1


    【概述】

    BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓度下限达到25µg/ml,最小检测蛋白量达到0.5µg,待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 

    BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%SDS5%Triton X-1005%的 Tween206080。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于1mMβ-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。


    【操作方法】

    1.配制BCA工作液:

    依据样品数量,将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液,并充分混匀。

    注:配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可37℃水浴促溶。

    2.稀释蛋白标准品:

    蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用0.9%NaClPBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表:

    编号

    稀释液体积

    蛋白标准液体积

    最终浓度

    A

    70µl

    5mg/ml BSA 30µl

    1.5mg/ml

    B

    30µl

    A管取60µl

    1mg/ml

    C

    20µl

    B管取60µl

    0.75mg/ml

    D

    30µl

    C管取60µl

    0.5mg/ml

    E

    60µl

    D管取60µl

    0.25mg/ml

    F

    60µl

    E管取60µl

    0.125mg/ml

    G

    60µl

    0µl

    0mg/ml

    3.蛋白浓度的检测

    a. 5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 

    b. 5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl,需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 

    c. 各孔加195µl BCA工作液 37℃放置30分钟。

    :也可以室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。

    d. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在2小时内测定,2小时内检测数据无显著变化。 


    4.数据计算

    a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标

    b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值(多孔则为平均OD)为纵坐

    c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得

    样品OD=0.60.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度x=0.37mg/ml

     

     

    【注意事项】

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. 不同96板的吸收值会有不同,得到OD有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)

    3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融

    4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶,可适当37℃水浴促溶后使用。

    5. 请使用96孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为595nm



    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

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