【保存条件】
室温(15-30℃)保存一年
【概述】
RNA holder是一种无毒的可直接使用的样品储存液,能迅速稳定组织,保护非冷冻细胞RNA于原位。可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNA holder保存液中,在室温可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃标本可以长期保存,RNA稳定存在不降解,取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。
【操作方法】
1. 根据要保存的各样本的体积,计算出所需 RNA holder用量。RNA holder的用量应当是组织体积的 10 倍(如 100mg 组织约用 1ml RNA holder);离心收集 2×106细胞 RNA holder的用量是1ml。
2. 将 RNA holder按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成任何一边最大厚度不大于0.5cm大小,然后将组织碎块放入到10倍体积的RNA holder中保存。注:组织过厚则RNA holder不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。
4. 保存时先将样本浸入RNA holder后置4℃冰箱过夜(使RNA holder完全渗入到组织中),然后转移至-20℃冰箱(RNA holder在-20℃仍为液态,有结晶析出为正常情况),或者过夜取出后直接转移至-80℃,可反复冻融20次不影响RNA质量。
【注意事项】
1. 组织和细胞取材要快速,防止RNA降解。冰冻组织不能用RNA holder保存,因其不能有效渗入冰冻组织中。
2. 保存样品的提取:组织样本从-20℃或-80℃取出后,复苏到室温后,取出组织块置于RNA提取液(如Trizol)中再行提取。细胞样本复温后低速离心收集细胞,去除RNA holder后,再加入RNA提取液提取RNA(细胞样本可直接在RNA holder中提取,需向混合物中加入10倍体积提取液如Trizol)。后续若需匀浆处理可直接在室温进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNA holder不影响后续提取质量。
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