产品介绍
本试剂盒采用可高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,可从各种浓度的TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收70bp-10kbp大小的DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质,回收率可达80%以上。每个离心吸附柱每次可吸附的DNA量为20μg。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
存储条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月。Buffer QG可能产生沉淀,若有沉淀使用前可在55℃水浴中预热10 min以溶解。
需要额外准备的材料
□ 无水乙醇(96%-100%)
□ 无菌1.5ml离心管
开始前注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
□ 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
□ 如下一步实验要求较高,核酸电泳时则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
□ 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
□ 如果回收率较低,可在胶充分溶解后检测pH值,如pH值大于7.5,可向含有DNA的胶溶液中加10-30µl 3M醋酸钠(pH5.2)将pH值调到5-7之间。
□ 回收<70bp或>10kbp的DNA片段时,应加大Buffer QG的体积,延长吸附和洗脱时间。
□ 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越少,回收率越低。
□ 高温及潮湿等不利环境因素对吸附柱产生影响,请将吸附柱储存于阴凉干燥的环境中。
开始前试剂准备
□ 按瓶子标签所示,加入4倍体积的无水乙醇稀释Buffer PW,于室温密封保存。
□ 确认Buffer QG溶液显示为黄色。
DNA浓度及纯度检测
回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-2.0,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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