产品细节图:
【保存条件】
-20 ℃保存，有效期12个月
【概述】
本品适用于小片段（5-500bp）单链 DNA 的杂交反应，获得更优质的杂交双链DNA片段，如shRNA、gRNA载体等构建。
【操作方法】
I．体系配制（如下20 µl体系为例）
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Reagent试剂 |
Amount 试剂量 |
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正链Oligo(10μM) 负链Oligo(10μM) ddH2O Annealing Buffer(10x) |
5μl 5μl 8 μl 2μl |
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20μl |
II. 退火条件
A. 水浴锅或Heat Block
1．在微管中混合等体积的等摩尔寡核苷酸。
2．将微管在95°C下孵育5分钟。
3．让微管缓慢冷却至室温(注：若水浴等水温升至最高后加入，勿中途取出)。
B. PCR（热循环）仪(可选择简易步骤或进阶步骤的其中一种使用)
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Cycles |
Temperature |
Time |
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Simple Protocol 简易步骤 |
Step 1: |
1 |
95°C |
5 min |
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Step 2: |
70 |
95°C (-1°C/cycle ) |
1 min |
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Step 3: |
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4°C |
HOLD |
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Cycles |
Temperature |
Time |
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Advanced Protocol 进阶操作步骤 （以Tm值55°C为例） |
Step 1: |
1 |
95°C |
5 min |
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Step 2: |
40* |
95°C (-1°C/cycle ) |
1 min |
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Step 3: |
1 |
55°C |
30min |
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Step 4: |
20 |
55°C* (-1°C/cycle ) |
1min |
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Step 5: |
|
4°C |
HOLD |
*步骤2和4中的循环数取决于要退火的寡核苷酸的Tm。
【注意事项】
1. 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，以免污染。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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