【保存条件】
-20ºC保存,有效期2年
【概述】
适用于包括细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV病毒包装、逆转录病毒等病毒包装时的转染,转染效率可高达90%以上,包装效果与其它进口转染试剂无异。
本试剂经过0.22μm过滤器除菌处理,可直接使用。
【操作方法】
对于贴壁细胞(以下均以6孔板为例,其它培养皿或培养板请根据相应面积换算):
1. 将细胞培养于培养皿或培养板内,通常在铺板后1-2天内长到70-90%。
2. 在转染前1-2小时,吸去细胞培养液,更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。
3. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl,若有多种质粒请混匀),以质量体积比1:3加入转染试剂6~12μl(如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl)。
4. 混匀后,室温孵育3-5分钟。
5. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM(若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640,具体根据转染细胞使用的培养基),充分混匀后静置10-15分钟。
6. 后均匀滴加到整个6孔板内(加入前吸出原培养板中500μl培养基),并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。
7. 在转染后4-6小时左右换液(毒性较小,亦可不换),更换为2ml新鲜的完全培养液,继续培养。
8. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。
【注意事项】
1. 注意无菌操作,防止污染。
2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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