柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(40×)-500ml

【保存条件】

室温保存,有效期1年

【概述】

柠檬酸钠-EDTA抗原修复液(Citrate-EDTA Antigen Retrieval Solution)是一种常用的抗原修复液，结合了柠檬酸钠和EDTA进行抗原修复的优点，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。

细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。抗原修复液采用了常用的柠檬酸钠缓冲液和EDTA，结合了两者修复抗原的优点，并经过适当优化，可以更加有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

【操作方法】

1. 对于石蜡切片：

a. 脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡5分钟，再换用新鲜的二甲苯脱蜡，共用二甲苯脱蜡3次。无水乙醇5分钟，两次。90%乙醇5分钟，两次，70%乙醇5分钟，一次。蒸馏水5分钟，两次。

b. 抗原修复：用重蒸水或Milli-Q水将本抗原修复液(40×)稀释40倍，配制成抗原修复液(1×)，例如1ml本抗原修复液(40X)加入39ml重蒸水或Milli-Q水，混合均匀，即得40ml抗原修复液(1×)。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约20分钟(加热时间可以控制在10-30分钟内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

2. 对于冰冻切片：

用免疫染色洗涤液洗涤切片5分钟。将切片浸泡在抗原修复液(1×)中，95-100℃加热约20分钟(加热时间可以控制在10-30分钟内，最佳的加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索)。抗原修复液(1×)使用前需预热到95-100℃。加热可以使用普通的水浴锅，也可以使用微波炉加热。如果使用微波炉加热，需注意避免暴沸和过多的水分蒸发。随后大约在20-30分钟内冷却至室温。用免疫染色洗涤液洗涤1-2次，每次3-5分钟。随后即可进行封闭等后续的免疫染色步骤。

3. 对于其它样品的抗原修复：可以参考石蜡切片或冰冻切片的步骤进行。

【注意事项】

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本抗原修复液使用前必须用重蒸水或Milli-Q水稀释40倍，配制成抗原修复液(1×)。