【保存条件】
室温避光储存,有效期1年
【概述】
苏木素染色也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。
本试剂为Hematoxylin, Mayer's (Lillie's Modification),是一种渐进式的核苏木精染色剂,具有多种组织学应用。细胞核染色强、干净、清晰,无需分化。苏木素染色后细胞核呈现蓝色。
【使用建议】
1.样品处理
a.对于石蜡切片:
二甲苯(自备)中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇浸泡5分钟;90%乙醇浸泡2分钟;80%乙醇浸泡2分钟;70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。
b.对于冰冻切片:
固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。
c.对于培养细胞:
固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
2.苏木素染色
对于上述处理好的样品:
a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,根据组织大小和厚度进行调整)。
b.蒸馏水洗去浮色,用自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟。
c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。
d.选做:根据不同分化液(自备)的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗10分钟。
此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。
3.脱水、透明、封片观察
70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞核呈蓝色。
【注意事项】
1. 染色液可以重复使用多次,认为效果不佳时再更换新的染色液。
2. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
3. 染色后的分化为选做步骤,但分化后细胞核着色更清晰。
4. 仅限于科研使用,不可用于各种食品药品或临床治疗中。
5. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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