亿涛生物(QQ:304215136)         电话:15622108587         邮箱:info@ecotopbio.com ON OFF

产品细节图:

细胞/组织核蛋白提取试剂盒-50T

品牌:ECOTOP | 货号:EK-6105-50T(货期:现货)
  • 所属大类 : 蛋白类试剂
  • 所属小类 : 蛋白质/抗原/多肽/酶
  • 品牌 : ECOTOP
  • 规格 : 50T
  • 原价 : ¥350.00
  • 促销价 : ¥350.00
  • -
    +

    【保存条件】

    4保存3个月-20℃保存一年

    【使用建议(仅供参考)】

    10×裂解缓冲液LBH稀释:用无菌去离子水稀释10倍,如取1ml10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH使用前添加相应蛋白酶抑制剂

    哺乳动物细胞核蛋白提取:

    1. 细胞收集(106–107个):

    对于贴壁细胞(70-90%汇合单层培养):从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次(注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落),吸去PBS,使用胰酶消化或刮刀(使用新鲜PBS)将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用(若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除)。

    对于悬浮细胞:将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟倒出并弃去上清液用PBS洗涤细胞1-2将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用

    1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)并在冰上孵育15分钟,让细胞膨胀破裂

    2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL(每100μL混合物加入6μL剧烈涡旋10秒钟。

    3. 4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。

    4. 将上清液转移到新鲜管中上清液为是细胞质部分,沉淀为细胞核部分

    5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。

    6. 4℃下以14000×g离心30分钟。

    7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验

    从 100 mg 组织中提取核蛋白

    1. 准备裂解缓冲液LBH(如前所述,使用前加入相应蛋白酶抑制剂

    2. PBS缓冲液冲洗组织两次丢弃PBS

    3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂)中。

    4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎,细胞核在显微镜下可视化。

    5. 4℃将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。

    6. 转移上清液到新鲜管,该部分是细胞质部分。

    7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟

    8. 4℃下以14000×g离心30分钟。

    9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验

    【注意事项】

    1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。

    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

    用户名:   (可为空)
    E-mail:   *(必填)
    评价等级:
    评论内容:   *(必填)

    高质量生物试剂供应商

    销售热线:15622108587

    地址:广东省广州市广州国际企业孵化器D座512室 销售热线:15622108587

    ©2016  亿涛生物 版权所有  粤ICP备20058672号 网站建设服务商 学智