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产品细节图:

细胞/组织线粒体提取试剂盒-100T

品牌:ECOTOP | 货号:EK-6115-100T(货期:1天)
  • 所属大类 : 细胞培养
  • 所属小类 : 常用生化试剂
  • 品牌 : ECOTOP
  • 规格 : 100T
  • 原价 : ¥600.00
  • 促销价 : ¥600.00
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    【保存条件】

    4保存3个月-20℃保存一年


    【使用建议(仅供参考)】

    选项A:使用基于试剂的方法分离线粒体

    1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中,而不是添加到储备溶液中。

    2. 2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞,小心地取出并丢弃上清液。

    3. 加入800μL线粒体分离试剂A,以中速涡旋5秒,并将试管在冰上孵育2分钟。

    注意:孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性

    4. 加入10μL线粒体分离试剂B,以最大速度涡旋5秒。

    5. 将试管在冰上孵育5分钟,孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒

    6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合(不要涡旋)。

    7. 离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。

    8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中,并在4°C下以12,000×g离心15分钟。

    注意:如需获得更纯的线粒体部分,减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物,更改为以3000×g离心15分钟。

    9. 将上清液(胞质部分)转移到新管中沉淀含有分离的线粒体。

    10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C然后12,000×g离心5分钟弃去上清液,沉淀即为纯化后得到的线粒体

    11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。


    选项B50-200mg组织分离线粒体

    1. 50-200mg组织在PBS溶液中切碎,使用匀浆机中破碎以破碎组织关联,应减少细胞破裂

    注意:如组织较硬如心脏组织,可50-200毫克的硬组织(心脏)在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块,并在冰上孵化三分钟。孵后,样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液,并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液,并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品,以破坏组织关联。

    2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟小心地取出并丢弃上清液。

    3. 加入800μL线粒体分离试剂A(可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml),以中速涡旋5秒,并将试管在冰上孵育2分钟。

    注意:孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性

    4. 加入10μL线粒体分离试剂B,以最大速度涡旋5秒。

    5. 将试管在冰上孵育5分钟,孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒

    6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合(不要涡旋)。

    7. 离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。

    8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中,并在4°C下以12,000×g离心15分钟。

    注意:如需获得更纯的线粒体部分,减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物,更改为以3000×g离心15分钟。

    9. 将上清液(胞质部分)转移到新管中沉淀含有分离的线粒体。

    10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C然后12,000×g离心5分钟弃去上清液,沉淀即为纯化后得到的线粒体

    11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。

     

    【注意事项】

    1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。

    2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    1.《Multifunction Sr, Co and F co-doped microporous coating on titanium of antibacterial, angiogenic and osteogenic activities》
    作者:Jianhong Zhou ,Lingzhou Zhao 影响因子:4.259
    期刊:《Scientific Reports 6, Article number: 29069 (2016)》 PMID:27353337

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