EasyLys-M 哺乳动物组织/细胞活性总蛋白提取试剂

【保存条件】

4℃保存，有效期1年。

【概述】

哺乳动物活性蛋白抽提试剂(EasyLys-M Mammalian Native Protein Extraction Reagent)，是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白提取试剂。本品与Thermo的M-PER® Mammalian Protein Extraction Reagent以及Sigma的CelLytic™ M mammalian cell lysis/extraction reagent非常相近，使用效果和用途也非常相近，很多时候可以考虑相互替代。

 本试剂制备的细胞裂解物可直接与各种报告基因检测（例如荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶）、蛋白激酶检测（例如 PKA、PKC、酪氨酸激酶）、免疫检测（例如 Western 免疫印迹、ELISA、RIA）和/或蛋白纯化程序兼容。

【产品特点】

l 兼容性强：抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程

l 作用温和：温和的除垢剂裂解，产生的抽提物直接与考马斯(Bradford)和BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容

l 非变性：维持荧光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他报告基因的活性，与其他供应商的产品和冷冻/解冻方法一样好或更出色

l 操作简单：贴壁细胞直接在板上裂解或者在剥离和洗涤后悬浮于溶液中

【使用建议】

取1ml的预冷裂解液中加入相应体积蛋白酶抑制剂混合物（如需磷酸化研究则需添加磷酸酶抑制剂）；混匀，放置在冰上备用；

1. 样品前处理（具体用量参考表1）：

a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入200-400μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器或其它设备匀浆，直至充分裂解。

2. 后处理：冰上或4℃振荡孵育裂解5-10分钟（振荡孵育有助于提升裂解效率，组织可延长裂解时间至20分钟）。将裂解后的样品最大转速或14000g于4℃下离心5-10分钟，取上清蛋白质转移到新的离心管中，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。（暂时不使用蛋白尽快保存于-80℃中，即用即取，避免反复冻融，避免长时间冻存）。

表1. 不同规格的细胞培养器皿中EasyLys-M 哺乳动物活性蛋白抽提试剂的用量表。

【注意事项】

1. 抽提蛋白产量低可能性：

a. 细胞或组织裂解不充分。延长冰上孵育时间或在孵育期间适当摇动，或适当增加蛋白抽提试剂的使用量。

b. 蛋白发生降解。加入蛋白酶抑制剂可抑制蛋白降解。

c. 组织匀浆不太充分。适当延长匀浆或研磨时间。

d. 蛋白溶液的粘稠度太高。一方面可以考虑加大抽提试剂的用量，另一方面可以考虑添加全能核酸酶等以降低粘稠度

2. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。