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SDT裂解液-100ml
ECOTOP货号:ED-8452-100ml(货期:1-2天)售价:¥180.00
SDT裂解液-100ml
【保存条件】 4℃保存,有效期6个月。-20℃保存,有效期1年。 【概述】 SDT裂解缓冲液用于裂解哺乳动物细胞和组织。其含有SDS、Tris-HCl、DTT,对样本全蛋白有很好的提取效果。 但其中所含的SDS会使蛋白质变性失活,因此不适合后续活性相关实验。试剂请于避光保存,以确保其稳定性。 【使用建议】 1. 取100mg动物组织或细胞(组织提前剪成小块)加入500μl PBS溶液中初步匀浆(60 Hz,45s),再加入500μl SDT裂解液。 2. 将上一步加有SDT裂解液的动物组织或细胞于4℃进行匀浆(60 Hz,20s)。 3. 低速短暂离心将管壁液体离下,后置于沸水浴(或100℃)3min。 4. 再次使用探头超声:40-50W超声5s,间隔5s,一共6个循环。 5. 将溶液置于沸水浴(或100℃)2min,10000g离心10min。 6. 收集上清进行后续实验。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 该试剂仅用于科研领域,不得用于临床诊断或其他用途。 3. SDT裂解液不适用于后续做与活性相关的实验,如免疫共沉淀。在进行蛋白质浓度测定时由于SDT裂解液中含有SDS和DTT,因此 Bradford法和BCA方法不适用,而应选择去垢剂和还原剂均兼容的荧光法测定蛋白质浓度。各种裂解液中含有的去垢剂均会影响胰蛋白酶活性,并且对质谱分析产生很大影响,因此均需要在蛋白质样品酶解前除去。 4. SDT裂解液中含有较高浓度的SDS,在低温下可能析出为正常现象,使用前只需将溶液置于37℃加热5-10min或至溶解即可。
3% 戊二醛固定液
ECOTOP货号:ED-8770-500ml(货期:1-2天)售价:¥540.00
3% 戊二醛固定液
【保存条件】 4℃避光保存,一年有效 【概述】 Glutaraldehyde溶液常用于样本固定,固定速度快,对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好,经常用于电镜标本的固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 【操作方法】 1. 根据实验具体要求操作。 2. 取新鲜标本,立即入Glutaraldehyde溶液4℃固定1~4h,稍大标本应适当延长固定时间。 3. 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2~4mm,一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 2. 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。 3. 温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但本固定液最好不要提高温度。 4. 取出新鲜组织后,应及时固定。无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Superstar飞克超敏ECL化学发光试剂盒-500ml
ECOTOP货号:EK-5008-500ml(货期:现货)售价:¥1150.00
Superstar飞克超敏ECL化学发光试剂盒-500ml
【保存条件】 4℃避光保存12月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物系统,SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂(具有极高灵敏度和高信噪比);可在日光灯下进行发光操作;发光迅速,荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000), 极其节省抗体。 【特点】 n 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 n 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间,在最佳条件下可产生长达24小时的光输出 n 稳定的试剂 - 在4℃下1年的试剂盒稳定性 n 更经济的抗体用量: 0.2至1.0μg/ mL一抗(从1 mg / mL原液中1:1000至1:5000稀释) 10至50 ng / mL二级抗体(从1 mg / mL原液中1:20,000至1:100,000稀释) 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取A:B=1:1混合(如需要1ml发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合),放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2 膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育2分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。 6. 暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1~5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3. 发光工作液孵育约2分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10 小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后配制新的ECL工作液重新发光和曝光。 4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:4000,二抗 1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。

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