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3% 戊二醛固定液
ECOTOP货号:ED-8770-500ml(货期:1-2天)售价:¥540.00
3% 戊二醛固定液
【保存条件】 4℃避光保存,一年有效 【概述】 Glutaraldehyde溶液常用于样本固定,固定速度快,对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好,经常用于电镜标本的固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 【操作方法】 1. 根据实验具体要求操作。 2. 取新鲜标本,立即入Glutaraldehyde溶液4℃固定1~4h,稍大标本应适当延长固定时间。 3. 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2~4mm,一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 2. 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。 3. 温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但本固定液最好不要提高温度。 4. 取出新鲜组织后,应及时固定。无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Superstar飞克超敏ECL化学发光试剂盒-500ml
ECOTOP货号:EK-5008-500ml(货期:现货)售价:¥1150.00
Superstar飞克超敏ECL化学发光试剂盒-500ml
【保存条件】 4℃避光保存12月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物系统,SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂(具有极高灵敏度和高信噪比);可在日光灯下进行发光操作;发光迅速,荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上,特别适用于痕量蛋白或核酸检测;可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000), 极其节省抗体。 【特点】 n 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 n 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间,在最佳条件下可产生长达24小时的光输出 n 稳定的试剂 - 在4℃下1年的试剂盒稳定性 n 更经济的抗体用量: 0.2至1.0μg/ mL一抗(从1 mg / mL原液中1:1000至1:5000稀释) 10至50 ng / mL二级抗体(从1 mg / mL原液中1:20,000至1:100,000稀释) 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取A:B=1:1混合(如需要1ml发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合),放入干净容器中混合。建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2 膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育2分钟,准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度,有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应,使用过少的发光工作液不利反应进行,也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜,搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开X光胶片暗盒,在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。 6. 暗房内压X光胶片,分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1~5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3. 发光工作液孵育约2分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10 小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后配制新的ECL工作液重新发光和曝光。 4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:4000,二抗 1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
5× FastBlot 快速半干转膜液(伯乐半干替代)
ECOTOP货号:ES-7018-500ml(货期:现货)售价:¥299.00
5× FastBlot 快速半干转膜液(伯乐半干替代)
【保存条件】 常温保存,至少稳定 12 个月 【概述】 FastBlot 快速蛋白电泳转膜液是一种改良的 Towbin 经典缓冲液,这种专有的配方大大提高了转移速度,而不会产生过多的热量而影响蛋白质。可用于半干转膜仪将 5-300kDa 蛋白从聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)快速半干转移至硝酸纤维素膜或 PVDF 膜。 【操作方法】 1. 使用前用去离子水将 5×溶液稀释至 1×工作液:例如将 200ml 5×FastBlot 快速蛋白电泳转膜液加入 600ml 去离子水中混匀,再加入 200ml 甲醇或乙醇充分混匀。(使用前预冷更优) 2. 将 PVDF 膜使用甲醇提前浸泡 3-5 分钟至透明状态,(NC 膜无需提前浸泡) 3. 按操作正确安装您的转膜设备并准备转膜。 4. 转膜条件(参考) 转膜类型 分子量 2 块mini 胶或 1 块midi 胶 1 块 mini 胶 转膜时间 1.5mm 凝胶 任意 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 10 分钟 高分子量蛋白 >150KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 10 分钟 低分子量蛋白 <30KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 5 分钟 其它分子量蛋白 5-150KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 7 分钟 注:若使用使用Biorad Trans-blot Turbo Transfer System(Cat: 1704150)设备,可直接替代其中转膜液。 【注意事项】 1. 本品需添加甲醇或乙醇后使用,使用过程中注意相应毒性的防护。 2. 转膜条件为参考条件,具体以实际实验操作优化标准为准。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-1ml×10管
ECOTOP货号:ES-8155-1ml×10管(货期:现货)售价:¥280.00
6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-1ml×10管
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻6×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。 2. 请按每50μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(6倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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