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RNA Chill RNase灭活试剂(25×)-1ml
ECOTOP货号:ES-8520-1ml(货期:现货)售价:¥310.00
RNA Chill RNase灭活试剂(25×)-1ml
【保存条件】 -20℃保存一年 【概述】 RNA Chill RNase灭活试剂(25×)设计用于代替DEPC用于分子生物学试剂,可用于与DEPC不兼容的溶液(例如Tris或MOPS缓冲液)、不能高压灭菌的溶液以及酶促反应中的无酶处理。 当酶学实验中试剂用RNA Chill RNase灭活试剂(25×)处理时,未观察到以下各类酶促反应受到抑制(包括但不限于):T7、T3和SP6 RNA聚合酶,体外转录; MMLV和AMV,逆转录(42°C);PCR实验的Taq酶。 【操作方法】 1. 在待处理的缓冲液或溶液中将RNA Chill RNase灭活试剂(25×)稀释至终浓度1×(如10ml待处理溶液中加入RNA Chill(25×) 0.4ml),并充分混合。 2. 将混合物在60°C下孵育10-20分钟,然后冷却至室温。然后缓冲液/溶液即可用于RNA分离和分析。处理过的溶液可以在室温、4°C或–20°C下储存直至使用。 3. 为消除初始处理后可能出现的任何RNase污染,可将重复使用后的处理过的溶液重新加热至60°C 10-20 分钟。 【注意事项】 1. RNA Chill RNase灭活试剂(25×)在高于45°C时具有活性,但高于此温度孵育的反应中可能会使某些酶失活。 因此,在加入某些酶之前用RNA Chill(25×)试剂处理反应缓冲液(Taq酶等耐高温酶除外)。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
伊文思蓝染色液(0.5%)-500ml
ECOTOP货号:ES-8435-500ml售价:¥440.00
伊文思蓝染色液(0.5%)-500ml
伊文思蓝染色液(0.5%)使用说明书【包装规格】产品编号产品名称包装ES-8435Evans Blue Stain Solution 0.5%100ml/500ml 使用说明书1份【保存条件】室温保存,有效期1年【概述】伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式C34H24N6Na4O14S4,分子量为960.80,CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂,因其分子量大小和血浆白蛋白相近,而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力,因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性,也用于细胞染色区分活细胞、死细胞,亦可测定血容量。伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量,其中0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞,但无法区分死亡和坏死。【使用建议】(一)血脑屏障通透性1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至1分钟,小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h后处死小鼠,取目的脑组织。2. 脑组织置于1.5ml离心管中,加入1ml PBS, 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。3. 取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育18~24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室温孵育24h。4. 1000g离心20~30 min或2000g离心15min。5. 取上述溶液1~2ml,用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内,加入100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀,染色3min(染色时间可适当延长,但不宜超过10min)。2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数500个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%【注意事项】1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性,请小心防护。2. 细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。3. 血脑屏障通透性实验中,伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
助感染试剂Polybrene 溶液(10mg/ml)-1ml×5管
ECOTOP货号:ES-8425-5ml(货期:现货)售价:¥420.00
助感染试剂Polybrene 溶液(10mg/ml)-1ml×5管
【保存条件】 4℃保存,有效期1年;-20℃保存,有效期2年 【概述】 Polybrene (聚凝胺),也称Hexadimethrine Bromide (海美溴铵),是一种聚溴化季铵阳离子,可显著提高慢病毒、腺病毒等病毒对某些细胞的感染效率,其原理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。另外,Polybrene也可用于哺乳动物细胞的转染、增强脂质体的转染效率。 该产品为超纯水配制并经0.22μm滤膜过滤除菌处理,可直接使用。 【使用建议-病毒助感染】 1. 推荐工作浓度:Polybrene最佳终浓度因不同细胞株而异,通常范围在2~10μg/ml,最常用的浓度为5~8μg/ml。可以通过查阅相关文献或者预实验来摸索。2.使用方法:Day1:按实验需要将细胞铺板(比如12孔板)。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃培养过夜。Day2:病毒感染前,从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化,参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度,并加入适量Polybrene,轻轻混匀。吸除细胞原有培养基,将病毒液+培养基+Polybrene加入细胞中,轻轻摇匀。37℃继续培养。Day4:吸除含病毒的培养基,换为新鲜的培养基。此时可以加入相应抗生素进行筛选。Day5-6:根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。 【注意事项】 1. 为避免反复冻融,收到本产品或本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃保存。 2. 本产品仅可用于科研实验,不可用作药品、食品等方面。 3. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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