2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液（DTT）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8152 SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,2×(with DTT) 1ml/10ml/100ml 使用说明书 1份 【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃，有效期1年 【概述】 2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温解冻2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。 2. 请按每10μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃，有效期1年 【概述】 2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温解冻2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。 2. 请按每10μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【操作方法】 裂解贴壁细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 1. 小心地从细胞中去除培养基。 用冰冷的PBS清洗一次。 2. 将冰冷IP/Co-IP细胞裂解缓冲液添加到细胞板中（6孔板中每孔加入200-400μl），并在冰上孵育5分钟，中途不间断混匀。 3. 将裂解液转移至微量离心管中，以约13,000×g的速度离心10分钟，以在4°C下沉淀细胞碎片。 4. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 裂解悬浮细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 1. 将细胞悬液以1,000×g离心5分钟以沉淀细胞，丢弃上清液。 2. 用冰冷的PBS洗涤细胞一次，以1,000×g离心5分钟以沉淀细胞。 3. 将冰冷的IP/Co-IP细胞裂解缓冲液添加到细胞沉淀中。每50 mg湿细胞沉淀（10：1 v / w）使用500μl裂解缓冲液。 4. 在冰上孵育裂解物5分钟。通过在4°C下以〜13,000×g离心10分钟去除细胞碎片。 5. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 【注意事项】 1. 本品可用于蛋白纯化和各种免疫检测（如ELISA、Western印迹）。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20ºC保存，一年有效 【概述】 NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。 【操作方法】 1. 对于培养细胞样品： a. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。b. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。对于细菌或酵母：对于1ml菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液，轻轻涡旋或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-4mg/ml，不同细胞有所不同。c. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。2. 对于组织样品：a. 把组织剪切成细小的碎片。b. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。c. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)d. 用玻璃匀浆器匀浆或组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。e. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。f. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 3. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【概述】 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50×) (Protease and phosphatase inhibitor cocktail for general use, 50×) 是一种通用型用于细胞或组织蛋白提取的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物组合。本品含有AEBSF, Aprotinin, Bestatin,E64 , Leupeptin, sodium fluoride, sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate, sodium orthovanadate等。 本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂/氨基肽酶抑制剂，以及丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。 【使用方法（仅供参考）】 1. 本蛋白酶磷酸酶抑制剂为50×的储存液，使用时按照1:50的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入20μl蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物)（1ml×2管磷酸酶抑制剂可以配套100ml裂解液使用），混匀后即可使用。含有蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【使用建议】 细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。 本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。主要由 Leupetin、Pepstatin A、Aprotinin、E-64 等组成。该混合物可以抑制绝大多数蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白 酶、木瓜蛋白酶等。该蛋白酶抑制剂混合液是100×的浓缩的DMSO溶液，适用于从哺乳动物组织、 细胞中提取蛋白质，能够更有效的获得目的蛋白质。提取出来的蛋白可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。 另配EDTA为单独包装，以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。 【使用建议】 1. 本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)（若需加入EDTA也是1：100比例加入裂解液中），混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃避光密封存储，有效期1年 【概述】 PMSF是丝氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶抑制剂，常做为蛋白酶抑制剂使用。在纯化过程中，为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白，通常在破碎菌体，上柱的过程中会加PMSF。PMSF可抑制多种蛋白酶活性，为防止蛋白降解，提高得率，一般都要加。本产品为保证PMSF活性，将其溶于异丙醇中保存。 【使用建议】 1. PMSF溶液工作浓度为17~174μg/ml（0.1~1mM）。 2. PMSF溶液在水溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一个分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h应补加一次。 【注意事项】 1. PMSF-20℃保存可能会有结晶析出，这是正常的，等到温度稍高混匀就可以了。 2. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一定要注意防护，手套和口罩。 3.一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 4.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

【保存条件】 -20℃避光密封存储，有效期1年 【概述】 PMSF是丝氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶抑制剂，常做为蛋白酶抑制剂使用。在纯化过程中，为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白，通常在破碎菌体，上柱的过程中会加PMSF。PMSF可抑制多种蛋白酶活性，为防止蛋白降解，提高得率，一般都要加。本产品为保证PMSF活性，将其溶于异丙醇中保存。 【使用建议】 1. PMSF溶液工作浓度为17~174μg/ml（0.1~1mM）。 2. PMSF溶液在水溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一个分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h应补加一次。 【注意事项】 1. PMSF-20℃保存可能会有结晶析出，这是正常的，等到温度稍高混匀就可以了。 2. PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一定要注意防护，手套和口罩。 3.一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 4.PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

5% SDS溶液使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8130 5% SDS Solution 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 SDS即Sodium dodecyl sulfate，中文名为十二烷基磺酸钠，也称十二烷基硫酸钠。常用生化试剂，用途广泛，可以用于SDS-PAGE、细菌碱裂解等。5% SDS溶液为100ml溶液中含有5g SDS，该溶液用水配制。 【注意事项】 1. 本产品对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年，4℃保存可延长有效期。 【概述】 pH校准液的pH值是已知的，并达到规定的准确度，其pH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH校准液常用于pH计的定位和斜率校准，其pH值准确度范围在±0.01。pH 10.01校准液是特指在25℃下，pH=10.01。 【注意事项】 1. 使用过程中应该避免污染。 2. 显示pH校准数值时，pH值会随温度不同而不同，具体如参考附录。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 【附录】 不同温度下，pH校准液对应的pH值： pH 4.01 pH 7.00 pH 10.00 5℃ 4.01 7.09 10.25 10℃ 4.00 7.06 10.18 15℃ 4.00 7.04 10.12 20℃ 4.00 7.02 10.06 25℃ 4.01 7.00 10.01 30℃ 4.01 6.99 9.97 35℃ 4.02 6.98 9.93 40℃ 4.03 6.97 9.89