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细胞/组织核蛋白提取试剂盒-50T
ECOTOP货号:EK-6105-50T(货期:现货)售价:¥350.00
细胞/组织核蛋白提取试剂盒-50T
【保存条件】 4℃保存3个月,-20℃保存一年 【使用建议(仅供参考)】 10×裂解缓冲液LBH稀释:用无菌去离子水稀释10倍,如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)。 哺乳动物细胞核蛋白提取: 1. 细胞收集(106–107个):对于贴壁细胞(70-90%汇合单层培养):从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次(注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落),吸去PBS,使用胰酶消化或刮刀(使用新鲜PBS)将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用(若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除)。 对于悬浮细胞:将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液,用PBS洗涤细胞1-2次,将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)并在冰上孵育15分钟,让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL(每100μL混合物加入6μL),剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中,上清液为是细胞质部分,沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白: 1. 准备1×裂解缓冲液LBH(如前所述,使用前加入相应蛋白酶抑制剂) 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次,丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH(裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂)中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎,细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管,该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
细胞/组织核蛋白提取试剂盒-100T
ECOTOP货号:EK-6105-100T(货期:现货)售价:¥550.00
细胞/组织核蛋白提取试剂盒-100T
【保存条件】 4℃保存3个月,-20℃保存一年 【使用建议(仅供参考)】 10×裂解缓冲液LBH稀释:用无菌去离子水稀释10倍,如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)。 哺乳动物细胞核蛋白提取: 1. 细胞收集(106–107个): 对于贴壁细胞(70-90%汇合单层培养):从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次(注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落),吸去PBS,使用胰酶消化或刮刀(使用新鲜PBS)将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用(若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除)。 对于悬浮细胞:将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液,用PBS洗涤细胞1-2次,将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)并在冰上孵育15分钟,让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL(每100μL混合物加入6μL),剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中,上清液为是细胞质部分,沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白: 1. 准备1×裂解缓冲液LBH(如前所述,使用前加入相应蛋白酶抑制剂) 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次,丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH(裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂)中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎,细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管,该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
ECOTOP货号:ED-8129-10ml(货期:现货)售价:¥130.00
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 溴酚蓝作为指示剂,用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(五倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
ECOTOP货号:ED-8522-10ml(货期:现货)售价:¥150.00
5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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