【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【概述】 本品是通用型磷酸酶抑制剂，可用于动物细胞或组织、真菌、细菌以及植物等蛋白提取及其它相关用途的磷酸酶抑制剂混合物(包括ß-Glycerophosphate Imidazole，Sodium fluoride，Sodium molybdate，Sodium orthovanadate，Sodium tartrate dihydrate等)，可广泛抑制蛋白提取物中的酸性、碱性、丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸磷酸酶等(acid, alkaline, Ser/Thr and Tyr phosphatases)。 【使用方法（仅供参考）】 1. 本磷酸酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl磷酸酶抑制剂混合物)（1ml 磷酸酶抑制剂可以配套100ml裂解液使用），混匀后即可使用。含有磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 可配合蛋白酶抑制剂复合物（ES-8135）使用。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 10×裂解缓冲液LBH稀释：用无菌去离子水稀释10倍，如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）。 哺乳动物细胞核蛋白提取： 1. 细胞收集（106–107个）：对于贴壁细胞（70-90%汇合单层培养）：从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次（注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落），吸去PBS，使用胰酶消化或刮刀（使用新鲜PBS）将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用（若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除）。 对于悬浮细胞：将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液，用PBS洗涤细胞1-2次，将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）并在冰上孵育15分钟，让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL（每100μL混合物加入6μL），剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中，上清液为是细胞质部分，沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白： 1. 准备1×裂解缓冲液LBH（如前所述，使用前加入相应蛋白酶抑制剂） 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次，丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH（裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂）中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎，细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管，该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 10×裂解缓冲液LBH稀释：用无菌去离子水稀释10倍，如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）。 哺乳动物细胞核蛋白提取： 1. 细胞收集（106–107个）： 对于贴壁细胞（70-90%汇合单层培养）：从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次（注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落），吸去PBS，使用胰酶消化或刮刀（使用新鲜PBS）将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用（若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除）。 对于悬浮细胞：将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液，用PBS洗涤细胞1-2次，将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟，倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH（使用前添加相应蛋白酶抑制剂）并在冰上孵育15分钟，让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL（每100μL混合物加入6μL），剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中，上清液为是细胞质部分，沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白： 1. 准备1×裂解缓冲液LBH（如前所述，使用前加入相应蛋白酶抑制剂） 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次，丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH（裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂）中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎，细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管，该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中，在冰上放置30分钟裂解，后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中，–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 溴酚蓝作为指示剂，用于追踪电泳进度。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE单色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(五倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。