【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理（标准操作建议0.8-5ml尿液）： 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻，请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态，然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管，注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀，充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 注：重要！如果在离心过程中使用固定角转子，则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 3. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理（标准操作建议0.8-5ml尿液）： 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻，请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态，然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管，注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀，充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 注：重要！如果在离心过程中使用固定角转子，则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 3. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 室温避光储存，有效期1年 【概述】 结晶紫(Crystal violet) 又称甲紫、龙胆紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。 【使用建议】 如用作细胞核染色，请根据需要使用PBS将本产品稀释使用，细胞核染色建议浓度0.1%，染色时间一般为10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 建议使用1-2个样品进行预实验。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 结晶紫对人体有害，请注意适当防护。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期12个月 【概述】 吖啶橙(AO)是一种选择性荧光阳离子染料，它能透过细胞膜，活细胞与死细胞均能被其染色。吖啶橙常用于荧光显微镜和流式细胞仪技术中细胞生理学与细胞周期的分析，该细胞渗透型染色液可与其他很多染色液及方法联合使用。 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过完整细胞膜，将活细胞的细胞核染成均匀的绿色荧光；而凋亡细胞由于其染色质固缩或断裂为大小不等的片段，吖啶橙将细胞核染成黄绿色亮绿色荧光；死亡细胞呈橙色荧光，但荧光很弱甚至会消失。溴化乙锭(EB)只能将具有不完整细胞膜的细胞染色，AO与EB联合使用，将坏死细胞染成橙色或橙红色，但这也包括与活细胞核形态相似的且无染色质固缩的细胞。因此，AO/EB染色试剂盒可以将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。 【使用方法（仅供参考）】 以下操作适用于大多数细胞系，如有特殊，可进行预实验优化方案。 1. 请将细胞分瓶离心。 2. 使用前将10×缓冲液用双蒸水稀释成1×缓冲液。 3. PBS洗涤细胞两次后，用适量的1×缓冲液重悬细胞调整细胞浓度为106个/ml。（贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。在某些必要情况下，可使用 Triton X-100 进行细胞通透。） 4. 取90μl细胞悬液，加入5μl AO染色液和5μl EB染色液，轻柔混匀。室温避光孵育1-5分钟。（最佳的染色浓度及培养时间，根据细胞的不同而不同。） 5. 使用荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4°C保存，有效期1年 【概述】 如果材料必须从多个来源、不同时间点收集，或者如果不能直接处理，则可能需要储存器官或组织样本。在此储存期间必须避免坏死和细胞凋亡，并且必须保持细胞的活化和多能性状态。Tissue Store新鲜细胞组织保存液的开发旨在优化新鲜器官和组织样本的储存最少48小时而不会出现细胞活化或细胞凋亡诱导等背景效应，96小时后亦可保存50%相对活力（相对新鲜对照）。可适用多种人体和小鼠组织，包括肿瘤、毛囊、皮肤、心脏、脾脏、大脑和骨骼肌。 本产品配方不含抗生素或抗真菌成分。如果需要，在使用前以标准细胞培养浓度补充这些成分。 【产品特点】 l 组织在低温条件(2-8℃)下可保持形态结构和功能活性至少48小时，最长可达96小时 l 操作简单，组织或细胞样本浸没到溶液中即可 l 无血清及其它蛋白质成份 【应用】 l 运输新鲜器官和组织样本 l 新鲜器官和组织样本的储存 【使用建议】 1. 将组织尽可以剪碎（不大于0.5cm宽×0.5cm厚为最佳，细胞常规消化离心收集）并尽快转移至预冷的Tissue Store新鲜细胞组织保存液（2-8°C）中，保证组织被保存液完全覆盖（运输空间要考虑组织贴壁可以增加保存液体积）。 2. （可选）出于运输目的，将样品转移到可封闭管中Tissue Store新鲜细胞组织保存液中。避免气泡以防止长时间接触空气。 3. 在 2–8 °C下储存或运输样品 4. 在运输/存储结束时，取出样本并直接与下游处理应用，例如解离成单细胞悬浮液使用等。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究 2. 请注意运输及冻存过程中的无菌操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 G418 Sulfate (G418硫酸盐)，也称作Geneticin (遗传霉素)、G418、G 418或者G-418，是一种结构类似于庆大霉素B1 (Gentamycin B1)的氨基糖苷类抗生素，来源于Micromonospora rhodorangea，常用于筛选表达neo基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。G418不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。本产品为50mg/ml G418水溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养。 【使用方法】 一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418维持培养。生长条件，细胞类型和其它的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过剂量反应性曲线(dose-response curve or kill curve)，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000μg/ml；植物细胞：10-100μg/ml；酵母细胞：500-1000μg/ml。具体浓度可参考文献或进行预实验测试。 【注意事项】 1. G418不要和其它抗生素/抗真菌剂(如青霉素/链霉素)共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其它的抗生素也会产生交叉活性。 2. G418加入培养体系中，未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞(未转染)可能在添加抗生素5-7天后才能被杀死，转染细胞(抗性克隆子)的克隆需要10-14天形成。 3. 即使加入有效剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。 4. 反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 G418 Sulfate (G418硫酸盐)，也称作Geneticin (遗传霉素)、G418、G 418或者G-418，是一种结构类似于庆大霉素B1 (Gentamycin B1)的氨基糖苷类抗生素，来源于Micromonospora rhodorangea，常用于筛选表达neo基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。G418不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。本产品为50mg/ml G418水溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养。 【使用方法】 一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418维持培养。生长条件，细胞类型和其它的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过剂量反应性曲线(dose-response curve or kill curve)，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000μg/ml；植物细胞：10-100μg/ml；酵母细胞：500-1000μg/ml。具体浓度可参考文献或进行预实验测试。 【注意事项】 1. G418不要和其它抗生素/抗真菌剂(如青霉素/链霉素)共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其它的抗生素也会产生交叉活性。 2. G418加入培养体系中，未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞(未转染)可能在添加抗生素5-7天后才能被杀死，转染细胞(抗性克隆子)的克隆需要10-14天形成。 3. 即使加入有效剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。 4. 反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃储藏，有效期1年。 【概述】 嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。 该溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可直接使用。 【使用建议】 1. 哺乳动物细胞建议使用浓度为1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。 2. LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，建议使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。 【注意事项】 1. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。