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尿液外泌体提取试剂-100ml
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5203-100ml(货期:现货)售价:¥1460.00
尿液外泌体提取试剂-100ml
【保存条件】 4ºC保存,有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡(30-120 nm),所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使,在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号,然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理(标准操作建议0.8-5ml尿液): 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻,请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态,然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管,注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离: 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中,并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀,充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后,在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后,吸走并丢弃上清液,外泌体即包含在试管底部的沉淀中(大多数情况下是不可见的)。 注:重要!如果在离心过程中使用固定角转子,则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表: 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后,所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离,保存在 4℃和-80℃,都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测; 3. 本品仅限用于科研实验。
尿液外泌体提取试剂-50ml
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5203-50ml(货期:现货)售价:¥850.00
尿液外泌体提取试剂-50ml
【保存条件】 4ºC保存,有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡(30-120 nm),所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使,在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号,然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理(标准操作建议0.8-5ml尿液): 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻,请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态,然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管,注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离: 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中,并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀,充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后,在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后,吸走并丢弃上清液,外泌体即包含在试管底部的沉淀中(大多数情况下是不可见的)。 注:重要!如果在离心过程中使用固定角转子,则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表: 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后,所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离,保存在 4℃和-80℃,都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测; 3. 本品仅限用于科研实验。
AO/EB双染色试剂盒
ECOTOP检测类试剂货号:EK-5801-100T(货期:1天)售价:¥190.00
AO/EB双染色试剂盒
【保存条件】 4℃避光保存,有效期12个月 【概述】 吖啶橙(AO)是一种选择性荧光阳离子染料,它能透过细胞膜,活细胞与死细胞均能被其染色。吖啶橙常用于荧光显微镜和流式细胞仪技术中细胞生理学与细胞周期的分析,该细胞渗透型染色液可与其他很多染色液及方法联合使用。 在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过完整细胞膜,将活细胞的细胞核染成均匀的绿色荧光;而凋亡细胞由于其染色质固缩或断裂为大小不等的片段,吖啶橙将细胞核染成黄绿色亮绿色荧光;死亡细胞呈橙色荧光,但荧光很弱甚至会消失。溴化乙锭(EB)只能将具有不完整细胞膜的细胞染色,AO与EB联合使用,将坏死细胞染成橙色或橙红色,但这也包括与活细胞核形态相似的且无染色质固缩的细胞。因此,AO/EB染色试剂盒可以将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。 【使用方法(仅供参考)】 以下操作适用于大多数细胞系,如有特殊,可进行预实验优化方案。 1. 请将细胞分瓶离心。 2. 使用前将10×缓冲液用双蒸水稀释成1×缓冲液。 3. PBS洗涤细胞两次后,用适量的1×缓冲液重悬细胞调整细胞浓度为106个/ml。(贴壁细胞可以在盖玻片上或细胞培养孔中原位染色。在某些必要情况下,可使用 Triton X-100 进行细胞通透。) 4. 取90μl细胞悬液,加入5μl AO染色液和5μl EB染色液,轻柔混匀。室温避光孵育1-5分钟。(最佳的染色浓度及培养时间,根据细胞的不同而不同。) 5. 使用荧光显微镜或流式细胞仪检测细胞荧光。 【注意事项】 1. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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