【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4°C保存，有效期1年 【概述】 如果材料必须从多个来源、不同时间点收集，或者如果不能直接处理，则可能需要储存器官或组织样本。在此储存期间必须避免坏死和细胞凋亡，并且必须保持细胞的活化和多能性状态。Tissue Store新鲜细胞组织保存液的开发旨在优化新鲜器官和组织样本的储存最少48小时而不会出现细胞活化或细胞凋亡诱导等背景效应，96小时后亦可保存50%相对活力（相对新鲜对照）。可适用多种人体和小鼠组织，包括肿瘤、毛囊、皮肤、心脏、脾脏、大脑和骨骼肌。 本产品配方不含抗生素或抗真菌成分。如果需要，在使用前以标准细胞培养浓度补充这些成分。 【产品特点】 l 组织在低温条件(2-8℃)下可保持形态结构和功能活性至少48小时，最长可达96小时 l 操作简单，组织或细胞样本浸没到溶液中即可 l 无血清及其它蛋白质成份 【应用】 l 运输新鲜器官和组织样本 l 新鲜器官和组织样本的储存 【使用建议】 1. 将组织尽可以剪碎（不大于0.5cm宽×0.5cm厚为最佳，细胞常规消化离心收集）并尽快转移至预冷的Tissue Store新鲜细胞组织保存液（2-8°C）中，保证组织被保存液完全覆盖（运输空间要考虑组织贴壁可以增加保存液体积）。 2. （可选）出于运输目的，将样品转移到可封闭管中Tissue Store新鲜细胞组织保存液中。避免气泡以防止长时间接触空气。 3. 在 2–8 °C下储存或运输样品 4. 在运输/存储结束时，取出样本并直接与下游处理应用，例如解离成单细胞悬浮液使用等。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究 2. 请注意运输及冻存过程中的无菌操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 G418 Sulfate (G418硫酸盐)，也称作Geneticin (遗传霉素)、G418、G 418或者G-418，是一种结构类似于庆大霉素B1 (Gentamycin B1)的氨基糖苷类抗生素，来源于Micromonospora rhodorangea，常用于筛选表达neo基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。G418不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。本产品为50mg/ml G418水溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养。 【使用方法】 一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418维持培养。生长条件，细胞类型和其它的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过剂量反应性曲线(dose-response curve or kill curve)，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000μg/ml；植物细胞：10-100μg/ml；酵母细胞：500-1000μg/ml。具体浓度可参考文献或进行预实验测试。 【注意事项】 1. G418不要和其它抗生素/抗真菌剂(如青霉素/链霉素)共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其它的抗生素也会产生交叉活性。 2. G418加入培养体系中，未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞(未转染)可能在添加抗生素5-7天后才能被杀死，转染细胞(抗性克隆子)的克隆需要10-14天形成。 3. 即使加入有效剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。 4. 反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 G418 Sulfate (G418硫酸盐)，也称作Geneticin (遗传霉素)、G418、G 418或者G-418，是一种结构类似于庆大霉素B1 (Gentamycin B1)的氨基糖苷类抗生素，来源于Micromonospora rhodorangea，常用于筛选表达neo基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。G418不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。本产品为50mg/ml G418水溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养。 【使用方法】 一般来说，刚开始筛选转化子需要高浓度的G418，并用一个较低浓度的G418维持培养。生长条件，细胞类型和其它的环境因素都可能影响G418的用量，因此第一次使用的实验体系建议通过剂量反应性曲线(dose-response curve or kill curve)，来确定最佳筛选浓度。通常情况，哺乳动物细胞筛选范围200-2000μg/ml；植物细胞：10-100μg/ml；酵母细胞：500-1000μg/ml。具体浓度可参考文献或进行预实验测试。 【注意事项】 1. G418不要和其它抗生素/抗真菌剂(如青霉素/链霉素)共同使用，因为它们是G418的竞争性抑制剂。其它的抗生素也会产生交叉活性。 2. G418加入培养体系中，未转染的细胞有可能不会被杀死，原因在于药物浓度过低，或者细胞密度过高。另外，快速分裂的细胞相对于缓慢增殖细胞，更容易被杀死。对照细胞(未转染)可能在添加抗生素5-7天后才能被杀死，转染细胞(抗性克隆子)的克隆需要10-14天形成。 3. 即使加入有效剂量的G418，细胞可能会继续分裂2-3次。G418的药效通常在2天后才变得明显。 4. 反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃储藏，有效期1年。 【概述】 嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。 该溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可直接使用。 【使用建议】 1. 哺乳动物细胞建议使用浓度为1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。 2. LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，建议使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。 【注意事项】 1. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温避光保存12个月, 2–8°C或-20°C保存24个月 【概述】 TripleSelect与胰蛋白酶一样，可裂解赖氨酸和精氨酸C-末端上的肽键。但是，TripleSelect无与伦比的纯度提高了特异性，其原因在于只有一种酶发挥作用。这减少了胰蛋白酶和其他提取物中存在的多种酶的裂解作用造成的损害。 【产品特点】 对细胞作用温和：纯度提高了特异性，其原因在于只有一种酶发挥作用。这减少了胰蛋白酶和其他提取物中由于多种酶切割造成的损害。 在室温下保持稳定：在室温或4°C下可保持稳定12-24个月，因此易于储存和处理、方便快捷。 无动物来源蛋白：与常用猪胰蛋白酶不同，本试剂不含动物来源成分。 无需终止，易于使用：无需使用胰蛋白酶抑制剂（如 FBS）终止消化，PBS或DMEM等稀释后自动失活。 【使用建议】 1. 使用前将TripleSelect 和完整的生长培养基恢复至室温。 2. 将待消化细胞培养器皿中培养去除。 3. 使用DPBS（无钙镁）清洗细胞，清洗完去除DPBS液体。 4. 加入相应体积的TripleSelect消化液（如25cm2瓶中加入1-2ml TripleSelect消化液，75cm2瓶中加入5ml TripleSelect消化液） 5. 37°C孵育至细胞变圆脱落（镜下观察），可轻拍培养瓶/皿。 6. 加入5ml 完全培养基至培养瓶/皿（体积根据不同面积培养瓶/皿），可轻轻吹打使细胞更好分离。 7. 将含细胞的液体移入15ml无菌离心管中。以200-500g转速离心5-10分钟使细胞沉淀。 8. 去除上清后，加入含血清的完全培养液使细胞沉淀重新悬浮，即可用于后续实验。 【注意事项】 1. 注意无菌操作，尽量避免污染。 2. 夏天若室内温度较高建议4°C保存，运输增加适量冰袋。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存，有效期2年 【概述】 0.5%胰酶细胞消化液(含EDTA)含0.5%胰酶、EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞的消化：a.吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。b.加入少量0.5%胰酶细胞消化液(含EDTA)，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。2. 组织的消化：a.不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】 1. 胰酶消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存，有效期2年 【概述】 0.05%胰酶细胞消化液(含EDTA)含0.05%胰酶、EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞的消化：a.吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。b.加入少量0.05%胰酶细胞消化液(含EDTA)，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。2. 组织的消化：a.不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】 1. 胰酶消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存，有效期1年 【概述】 Sodium Pyruvate，中文名为丙酮酸钠。Sodium Pyruvate的分子式为C3H3NaO3，CAS号为113-24-6，分子量为110.0。 丙酮酸钠是细胞培养的常用添加剂，通常在添加葡萄糖后，丙酮酸钠还可作为能量来源而补充到细胞培养基中，因此常作为替代性碳源，并且可避免葡萄糖作为唯一碳源时代谢产物乳酸的堆积。丙酮酸(Pyruvate)作为丙酮酸钠的阴离子，是糖酵解途径(glycolysis pathway)的代谢产物，因此并不是必须的细胞培养添加剂。通常在低葡萄糖配方(如1.0g/L葡萄糖)的培养基中加入丙酮酸钠，有时也在高糖细胞培养基中添加丙酮酸钠。如果细胞已在添加丙酮酸钠的培养基中生长，细胞会对丙酮酸钠表现出一定的依赖性，一旦从培养基中突然撤走丙酮酸钠，细胞的生长可能会出现一个短暂的延迟，因此通常宜维持添加丙酮酸钠。 该产品经0.22μm滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养。 【使用建议（仅供参考）】 100mM丙酮酸钠溶液常以1:100加入细胞培养液中，不同用途的工作浓度有所不同。具体的最佳工作浓度请参考相关文献，或根据实验目的，以及所培养的特定细胞和组织，通过实验进行摸索和优化。 【注意事项】 1. 该产品为无菌产品，应尽量避免微生物污染。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。