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细胞/组织核蛋白提取试剂盒-50T
ECOTOP蛋白质/抗原/多肽/酶货号:EK-6105-50T(货期:现货)售价:¥350.00
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【保存条件】 4℃保存3个月,-20℃保存一年 【使用建议(仅供参考)】 10×裂解缓冲液LBH稀释:用无菌去离子水稀释10倍,如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)。 哺乳动物细胞核蛋白提取: 1. 细胞收集(106–107个):对于贴壁细胞(70-90%汇合单层培养):从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次(注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落),吸去PBS,使用胰酶消化或刮刀(使用新鲜PBS)将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用(若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除)。 对于悬浮细胞:将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液,用PBS洗涤细胞1-2次,将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)并在冰上孵育15分钟,让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL(每100μL混合物加入6μL),剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中,上清液为是细胞质部分,沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白: 1. 准备1×裂解缓冲液LBH(如前所述,使用前加入相应蛋白酶抑制剂) 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次,丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH(裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂)中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎,细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管,该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
细胞/组织核蛋白提取试剂盒-100T
ECOTOP蛋白质/抗原/多肽/酶货号:EK-6105-100T(货期:现货)售价:¥550.00
细胞/组织核蛋白提取试剂盒-100T
【保存条件】 4℃保存3个月,-20℃保存一年 【使用建议(仅供参考)】 10×裂解缓冲液LBH稀释:用无菌去离子水稀释10倍,如取1ml的10×裂解缓冲液LBH加入9ml去离子水即得1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)。 哺乳动物细胞核蛋白提取: 1. 细胞收集(106–107个): 对于贴壁细胞(70-90%汇合单层培养):从细胞中取出生长培养基后用PBS冲洗细胞两次(注意不要冲洗过于用力造成细胞脱落),吸去PBS,使用胰酶消化或刮刀(使用新鲜PBS)将细胞刮入适当的锥形离心管中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用(若使用胰酶消化则需用PBS重复清洗离心1-2次尽可能将胰酶去除)。 对于悬浮细胞:将细胞收集到适当的锥形离心管中以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液,用PBS洗涤细胞1-2次,将细胞沉淀重悬于PBS中。以450×g离心5分钟,倒出并弃去上清液以收集细胞沉淀备用。 1. 将收集的细胞中加入500μL 1×裂解缓冲液LBH(使用前添加相应蛋白酶抑制剂)并在冰上孵育15分钟,让细胞膨胀破裂。 2. 后在裂解缓冲液中加入裂解缓冲液CA 30μL(每100μL混合物加入6μL),剧烈涡旋10秒钟。 3. 在4℃下以10,000–11,000×g立即离心30-60秒。 4. 将上清液转移到新鲜管中,上清液为是细胞质部分,沉淀为细胞核部分。 5. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 6. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 7. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 从 100 mg 组织中提取核蛋白: 1. 准备1×裂解缓冲液LBH(如前所述,使用前加入相应蛋白酶抑制剂) 2. 用PBS缓冲液冲洗组织两次,丢弃PBS。 3. 将组织轻轻重悬于1,000μL的1×裂解缓冲液LBH(裂解液使用前加入相应蛋白酶抑制剂)中。 4. 低温匀浆组织直到>90%的细胞破碎,细胞核在显微镜下可视化。 5. 在4℃下将破碎的细胞以10,000-11,000×g离心20分钟。 6. 转移上清液到新鲜管,该部分是细胞质部分。 7. 将粗核沉淀重新悬浮在50μl完整的提取缓冲液EXB中,在冰上放置30分钟裂解,后涡旋10分钟。 8. 在4℃下以14000×g离心30分钟。 9. 转移上清液即细胞核蛋白至新的离心管中,–80°C或者液氮中保存蛋白或直接进行后续实验。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

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