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EDTA脱钙液 pH7.2
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EDTA脱钙液 pH7.2
【保存条件】 室温保存,有效期1年 【概述】 一些组织内含有骨质或钙化灶时,含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同,较难切除完整的切片。对含钙组织最好固定之后,再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游的实验,如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。 EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂,对组织结构影响最小,可以较好的保存组织的某些酶类,经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢,一般脱需要数周至数月。 【使用建议】 1. 骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约5mm。 2. 组织固定后,用PBS清洗3次,每次20min。 3. 组织用蒸馏水洗清洗3次,每次20min。 4. 组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中,脱钙10~30天或更长时间。如果想加快脱钙速度,可以置于37℃进行脱钙。如果必要,更换新的EDTA脱钙液继续脱钙,多数组织脱钙2周~3个月即可,每周更换一次,直至终点。亦可采用微波快速脱钙法:微波炉设在200W左右的档位,每次加热5min,依据组织厚度和密度重复3~5min,中间间隔3~5min。 5. 用蒸馏水冲洗数次。 6. 常规脱水、包埋。 【注意事项】 1. 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可。 2. 适当加温能加快脱钙的速度,一般不应超过37~40℃,温度过高容易使骨组织造成松散解体,尤其不可大于60℃。 3. 脱钙应彻底,防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间,以免脱钙过长引起组织损害。 4. 脱钙用具避免使用金属容器,尽量使用玻璃容器。 5. 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行,不应先脱钙后固定,以便减少组织的损伤程度。 6. 每隔一段时间检测一次脱钙程度,避免脱钙过度,脱钙过度会增加组织的损伤程度,影响染色结果。 7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 8. 脱钙终点的测定(物理法):采用针刺、手掐、钳夹等方法,当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害,尽量避免用力过大或反复检测。

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