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哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒-100T
ECOTOP货号:EK-6200-100T(货期:现货)售价:¥698.00
哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒-100T
【保存条件】 EK-6200-A于4℃保存,其余-20℃保存,有效期1年。 【概述】 哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验。 【使用建议】 取1ml的预冷裂解液 Total Protein Extraction Buffer中加入20ul的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物和10ul PMSF;混匀,放置在冰上备用; 1. 样品前处理: a) 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。 b) 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。 c) 对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 2. 后处理:将裂解后的样品10000-14000g于4℃下离心15-30分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。(暂时不使用蛋白尽快保存于-80℃中,即用即取,避免反复冻融,避免长时间冻存)。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀,可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 为保证最佳的使用效果,请尽量避免过多的反复冻融,可分装后使用。 4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 5. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 6. 该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒-50T
ECOTOP货号:EK-6200-50T(货期:现货)售价:¥498.00
哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒-50T
【保存条件】 EK-6200-A于4℃保存,其余-20℃保存,有效期1年。 【概述】 哺乳动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验。 【使用建议】 取1ml的预冷裂解液 Total Protein Extraction Buffer中加入20ul的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物和10ul PMSF;混匀,放置在冰上备用; 1. 样品前处理: a) 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。 b) 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。 c) 对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 2. 后处理:将裂解后的样品10000-14000g于4℃下离心15-30分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。(暂时不使用蛋白尽快保存于-80℃中,即用即取,避免反复冻融,避免长时间冻存)。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀,可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 为保证最佳的使用效果,请尽量避免过多的反复冻融,可分装后使用。 4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 5. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 6. 该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
苏木素伊红(HE)染色试剂盒-500ml×2
ECOTOP货号:EK-5121-500ml×2(货期:现货)售价:¥740.00
苏木素伊红(HE)染色试剂盒-500ml×2
【保存条件】 室温避光保存,有效期至少一年 【概述】 苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。 伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料,在水中解离成带负电荷的阴离子,可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合,从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色,与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比,从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。 本试剂盒使用试剂为优化后的Mayer法配方,苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色或红色。 【使用方法(仅供参考)】 1.样品处理a.对于石蜡切片:二甲苯(自备)中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇浸泡5分钟;90%乙醇浸泡2分钟;80%乙醇浸泡2分钟;70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。b.对于冰冻切片:固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。c.对于培养细胞:固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。2.苏木素伊红(HE)染色对于上述处理好的样品:a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,根据组织大小和厚度进行调整)。b.蒸馏水洗去浮色,用适当的返蓝液浸泡样品10-60s(亦可用自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟)。c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。d.选做:根据不同分化液(自备)的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗10分钟。e.伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。3.脱水、透明、封片观察70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞核呈蓝色,而细胞浆呈粉红色或红色。 【注意事项】 1. 染色后的分化为选做步骤,但分化后核质着色更清晰。 2. 染色液可以重复使用多次,认为效果不佳时再更换新的染色液。 3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。 4. 伊红在水和梯度乙醇中会出现脱色,因此建议快速脱水。 5. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
苏木素伊红(HE)染色试剂盒-100ml×2
ECOTOP货号:EK-5121-100ml×2(货期:现货)售价:¥260.00
苏木素伊红(HE)染色试剂盒-100ml×2
【保存条件】 室温避光保存,有效期至少一年 【概述】 苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。氧化苏木素(也称氧化苏木精)和铝离子等形成有色的复合物的过程也被称为Dye Lake Formation。细胞核内基因组DNA的双螺旋结构中,双链上的磷酸基团向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的氧化苏木素复合物结合,从而形成细胞核染色。苏木素染色液有多种不同的配制方法,不同的方法可以把细胞核染色成不同深浅的蓝色或蓝紫色。 伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料,在水中解离成带负电荷的阴离子,可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合,从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色,与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比,从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。 本试剂盒使用试剂为优化后的Mayer法配方,苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色或红色。 【使用方法(仅供参考)】 1.样品处理a.对于石蜡切片:二甲苯(自备)中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇浸泡5分钟;90%乙醇浸泡2分钟;80%乙醇浸泡2分钟;70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。b.对于冰冻切片:固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。c.对于培养细胞:固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。2.苏木素伊红(HE)染色对于上述处理好的样品:a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,根据组织大小和厚度进行调整)。b.蒸馏水洗去浮色,用适当的返蓝液浸泡样品10-60s(亦可用自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟)。c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。d.选做:根据不同分化液(自备)的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗10分钟。e.伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。3.脱水、透明、封片观察70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞核呈蓝色,而细胞浆呈粉红色或红色。 【注意事项】 1. 染色后的分化为选做步骤,但分化后核质着色更清晰。 2. 染色液可以重复使用多次,认为效果不佳时再更换新的染色液。 3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。 4. 伊红在水和梯度乙醇中会出现脱色,因此建议快速脱水。 5. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
SDT裂解液-100ml
ECOTOP货号:ED-8452-100ml(货期:1-2天)售价:¥180.00
SDT裂解液-100ml
【保存条件】 4℃保存,有效期6个月。-20℃保存,有效期1年。 【概述】 SDT裂解缓冲液用于裂解哺乳动物细胞和组织。其含有SDS、Tris-HCl、DTT,对样本全蛋白有很好的提取效果。 但其中所含的SDS会使蛋白质变性失活,因此不适合后续活性相关实验。试剂请于避光保存,以确保其稳定性。 【使用建议】 1. 取100mg动物组织或细胞(组织提前剪成小块)加入500μl PBS溶液中初步匀浆(60 Hz,45s),再加入500μl SDT裂解液。 2. 将上一步加有SDT裂解液的动物组织或细胞于4℃进行匀浆(60 Hz,20s)。 3. 低速短暂离心将管壁液体离下,后置于沸水浴(或100℃)3min。 4. 再次使用探头超声:40-50W超声5s,间隔5s,一共6个循环。 5. 将溶液置于沸水浴(或100℃)2min,10000g离心10min。 6. 收集上清进行后续实验。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 该试剂仅用于科研领域,不得用于临床诊断或其他用途。 3. SDT裂解液不适用于后续做与活性相关的实验,如免疫共沉淀。在进行蛋白质浓度测定时由于SDT裂解液中含有SDS和DTT,因此 Bradford法和BCA方法不适用,而应选择去垢剂和还原剂均兼容的荧光法测定蛋白质浓度。各种裂解液中含有的去垢剂均会影响胰蛋白酶活性,并且对质谱分析产生很大影响,因此均需要在蛋白质样品酶解前除去。 4. SDT裂解液中含有较高浓度的SDS,在低温下可能析出为正常现象,使用前只需将溶液置于37℃加热5-10min或至溶解即可。

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