【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 无菌去离子水用途广泛，可用于溶液的配制和分子生物学实验中的普通PCR体系构建等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液（Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS），主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。 D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。 该HBSS缓冲液为即用型，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途，使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液（Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS），主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。 D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。 该HBSS缓冲液为即用型，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途，使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液（Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS），主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。 D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。 该HBSS缓冲液为即用型，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途，使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液（Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS），主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。 D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。 该HBSS缓冲液为即用型，经过滤除菌，可以直接用于细胞培养过程中细胞的洗涤等常规用途，使用前不必再进行稀释或过滤除菌等任何处理。 【注意事项】 1. HBSS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 【操作方法】 I: 样品准备： 1. 取出血浆样品并置于冰上。如果样品是冷冻的，将样品在25-37°C的温度下水浴解冻直到完全变成液体，然后放在冰上直到下面操作开始。 2. 室温下以2000×g离心血浆样品20分钟以去除细胞和碎片。 3. 在不干扰沉淀的情况下将部分澄清的上清液血浆转移到新离心管中。 4. 在室温条件下将新离心管以 10,000×g 离心 20 分钟以去除杂质。 5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新管中，不要干扰沉淀，并将其置于冰上，直到准备好进行分离 6. 继续步骤“外泌体分离（用蛋白酶处理）”或“外泌体分离（无蛋白酶处理）”。 IIA:外泌体分离（用蛋白酶处理）： 建议使用蛋白酶 K处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低），若这与您的研究内容有冲突，可选择“分离外泌体（未经蛋白酶处理）操作步骤。 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 向样品中加入 0.05 倍体积的蛋白酶 K。例如：对于100µl起始体积的血浆，加入5µl蛋白酶 K 溶液。 4. 涡旋样品，将溶液试管置于37℃下孵育10分钟。 5. 加入 0.2 倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 6. 充分混合经蛋白酶 K处理的血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或倒置直到溶液均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 7. 将样品在 2-8°C下孵育30分钟。 8. 孵育后，将样品在室温下以10,000×g离心5分钟。（注意：对于小鼠血浆，在4°C下离心30分钟。） 9. 通过移液器吸出上清液并丢弃，此时外泌体包含在试管底部的颗粒中。 10. （可选步骤）再次以10,000×g转速离心试管30秒收集任何可能残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液。 11. 继续“外泌体重悬”步骤 IIB: 外泌体分离（无蛋白酶处理）： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入 0.5 倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 加入0.2倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 4. 充分混合血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或吹打直到溶液彻底均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 5. 将样品在室温下孵育10分钟。 6. 孵育后，将样品在室温下以10,000 × g离心5分钟 7. 通过移液器吸出上清液并丢弃，外泌体包含在试管底部的颗粒中。 8. （可选步骤）再次以 10,000×g 离心管 30 秒收集任何残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液 9. 继续“外泌体重悬”步骤 III: 外泌体重悬 1. 将 1×PBS 或类似缓冲液添加到颗粒中并上下涡旋或吸管以重悬外泌体。 起始血浆体积 重悬体积 100µl 25-50µl 1ml 100-500µl 2. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化 3. 提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存 【注意事项】 1. 血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃都会对产量有一定的影响。 2. 本品仅限用于科研实验

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 【操作方法】 I: 样品准备： 1. 取出血浆样品并置于冰上。如果样品是冷冻的，将样品在25-37°C的温度下水浴解冻直到完全变成液体，然后放在冰上直到下面操作开始。 2. 室温下以2000×g离心血浆样品20分钟以去除细胞和碎片。 3. 在不干扰沉淀的情况下将部分澄清的上清液血浆转移到新离心管中。 4. 在室温条件下将新离心管以 10,000×g 离心 20 分钟以去除杂质。 5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新管中，不要干扰沉淀，并将其置于冰上，直到准备好进行分离 6. 继续步骤“外泌体分离（用蛋白酶处理）”或“外泌体分离（无蛋白酶处理）”。 IIA:外泌体分离（用蛋白酶处理）： 建议使用蛋白酶 K处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低），若这与您的研究内容有冲突，可选择“分离外泌体（未经蛋白酶处理）操作步骤。 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 向样品中加入 0.05 倍体积的蛋白酶 K。例如：对于100µl起始体积的血浆，加入5µl蛋白酶 K 溶液。 4. 涡旋样品，将溶液试管置于37℃下孵育10分钟。 5. 加入 0.2 倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 6. 充分混合经蛋白酶 K处理的血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或倒置直到溶液均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 7. 将样品在 2-8°C下孵育30分钟。 8. 孵育后，将样品在室温下以10,000×g离心5分钟。（注意：对于小鼠血浆，在4°C下离心30分钟。） 9. 通过移液器吸出上清液并丢弃，此时外泌体包含在试管底部的颗粒中。 10. （可选步骤）再次以10,000×g转速离心试管30秒收集任何可能残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液。 11. 继续“外泌体重悬”步骤 IIB: 外泌体分离（无蛋白酶处理）： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入 0.5 倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 加入0.2倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 4. 充分混合血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或吹打直到溶液彻底均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 5. 将样品在室温下孵育10分钟。 6. 孵育后，将样品在室温下以10,000 × g离心5分钟 7. 通过移液器吸出上清液并丢弃，外泌体包含在试管底部的颗粒中。 8. （可选步骤）再次以 10,000×g 离心管 30 秒收集任何残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液 9. 继续“外泌体重悬”步骤 III: 外泌体重悬 1. 将 1×PBS 或类似缓冲液添加到颗粒中并上下涡旋或吸管以重悬外泌体。 起始血浆体积 重悬体积 100µl 25-50µl 1ml 100-500µl 2. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化 3. 提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存 【注意事项】 1. 血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃都会对产量有一定的影响。 2. 本品仅限用于科研实验

【保存条件】 4ºC保存，有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离，但是目前使用的方法繁琐，非特异性且困难。ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子，从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分（即外泌体）从溶液中挤出，从而允许它们在短暂，低速离心后收集。 ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。•为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率• 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体• 避免耗时的超速离心• 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理： 1. 收集细胞培养基。 2. 以2000×g离心细胞培养基30分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中，注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积的ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂。如1ml上清液加入0.5ml提取试剂，或10ml上清液加入5ml提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的上清液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 25-100μl 10ml 100μl-1ml 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存，4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 4. 做少量WB实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离 外泌体做RNA或蛋白质分析，我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 6. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4ºC保存，有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离，但是目前使用的方法繁琐，非特异性且困难。ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子，从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分（即外泌体）从溶液中挤出，从而允许它们在短暂，低速离心后收集。 ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。•为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率• 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体• 避免耗时的超速离心• 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理： 1. 收集细胞培养基。 2. 以2000×g离心细胞培养基30分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中，注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积的ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂。如1ml上清液加入0.5ml提取试剂，或10ml上清液加入5ml提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的上清液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 25-100μl 10ml 100μl-1ml 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存，4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 4. 做少量WB实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离 外泌体做RNA或蛋白质分析，我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 6. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。