【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 2-8℃保存，有效期1年 【概述】 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit），是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色研制而成。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已死亡。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 本试剂盒足够检测100个细胞样品。 【使用建议（仅供参考）】 1. 收集细胞：对于贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化下细胞。对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清，用1毫升或根据细胞的量用适当细胞重悬液重新悬起细胞。 2.台盼蓝染色：吸取100微升重悬的细胞到一塑料离心管内，加入100微升台盼蓝染色液(2X)，轻轻混匀，染色3分钟(染色3分钟时间已经足够，染色时间可以更长一些，但不宜超过10分钟)。注：对于重悬于细胞培养液中的细胞，也可以直接加入等体积的台盼蓝染色液(2X)进行染色。 3.计数：吸取少量经过染色的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 本试剂盒提供的两种溶液都是无菌的，使用时最好在超净台内进行，避免细菌污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 本产品长时间存放可能会出现少量颗粒状沉淀，可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 4. 台盼蓝对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 5. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml） 5mg/ml潮霉素B加入体积（ml） 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

【保存条件】 -20℃保存一年 【概述】 细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素，可以有效防止微生物的污染。本品青霉素的含量为10kU/ml，链霉素的含量为10mg/ml。该溶液用0.9%氯化钠配制，经0.22μm滤膜过滤除菌，使用时按照100倍稀释使用即可。 【使用建议（仅供参考）】 1. 在无菌的细胞培养液中直接添加：按照每500ml细胞培养液添加5ml的比例加入青链霉素混合液(100×)，混匀即可使用。 2. 配制非无菌细胞培养液时加入，然后再过滤除菌：配制细胞培养液时按照每配制1L细胞培养液加入10ml 的比例加入青链霉素混合液(100×)，配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存,有效期2年 【概述】 0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA)含0.25%胰酶、EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞的消化：a.吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。b.加入少量0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA)，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。2. 组织的消化：a.不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】 1. 胰酶消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液，经过除菌处理，可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1.PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2.PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3.为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃避光保存，至少1年有效期。 【进口原料】 ROCHE REF10236276001, LOT53197821（不同批次产品原料批次会有更新） 【概述】 DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐)是一种能够与DNA中大部分A、T碱基相互结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。当DAPI与双链DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm。DAPI的发射光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白GFP或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发射波长仅有少部分重叠，可以利用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。本产品为DAPI-DMF溶液，浓度为1mg/ml。使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。用于细胞核染色时，推荐的DAPI工作浓度为0.5-10μg/ml。 【使用方法（仅供参考）】 取适量1mg/ml DAPI染色液加到PBS中，制备成0.5-10μg/ml的DAPI染色液。 1. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI染色。 2. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。 3. 室温放置5-10分钟。 4. 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。 5. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。 【注意事项】 1. DAPI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。 2. 本产品需避光，并尽量避免反复冻融。 3. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

【保存条件】 4-8℃保存，有效期1年 【概述】 SBF模拟体液是一种离子浓度接近人体血浆的亚稳定溶液。该产品经过过滤除菌处理，在36.5℃下pH为7.4 。 表一.人类血浆和SBF模拟体液的离子浓度 离子浓度 SBF模拟体液 人类血浆 Na+ 142.0 142.0 K+ 5.0 5.0 Mg2+ 1.5 1.5 Ca2+ 2.5 2.5 Cl- 148.8 103.0 HCO3- 4.2 27.0 HPO42- 1.0 1.0 SO42- 0.5 0.5 【注意事项】 1. SBF模拟体液（无菌）为无菌溶液，如有无菌要求请注意无菌操作。 2. 如果该产品在低温储存过程中出现沉淀，请勿再次使用。 3. 该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 4. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 本裂解液经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。本裂解液的主要有效成分为氯化铵。本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。 【使用建议（仅供参考）】 1. 先将10×红细胞裂解液进行稀释，如取10ml母液加入90ml无菌去离子水稀释为工作液。 2. 1倍体积的新鲜全血加入3倍体积的1×红细胞裂解液。如1ml新鲜全血加入3ml1×红细胞裂解液，轻轻涡旋或颠倒混匀。 3. 冰上放置15分钟，其间轻轻涡旋混匀两次，红细胞裂解后，溶液应该是清亮透明的。 4. 收集细胞：4℃，450×g离心10分钟以沉淀白细胞，小心吸弃上清液。 5. 向白细胞沉淀中加入两倍体积的1×红细胞裂解液，轻轻涡旋充分重悬白细胞。如起始血液为1ml，则加入2ml的1×红细胞裂解液。 6. 4℃，450×g离心10分钟沉淀白细胞，小心并彻底吸去上清液。 7. 重悬细胞，用于后续实验；如提取RNA，最好于此步开始使用DEPC水配制的溶液进行操作。（组织细胞处理：新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液，离心弃去上清液，其余同上。） 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。