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DNAex ZOL快速基因组DNA提取试剂-100ml
ECOTOP货号:EK-5312-100ml售价:¥450.00
DNAex ZOL快速基因组DNA提取试剂-100ml
【保存条件】室温保存,有效期1年【概述】DNAex ZOL试剂(基因组DNA分离试剂)是一种完整且现成的试剂,用于从动物、植物、酵母和细菌来源的固体和液体样本中分离基因组DNA。DNAex ZOL试剂程序基于使用一种新型的胍-洗涤剂裂解溶液,该溶液允许从细胞裂解液中选择性沉淀DNA。DNAex ZOL试剂协议速度快,允许从大量小批量或大批量样品中分离基因组DNA。 【操作方法】I. 样本处理a. 培养皿中细胞样本处理:每个10平方厘米的培养皿中加入0.75-1.0毫升的DNAex ZOL试剂。通过吹打培养皿使细胞裂解,并轻轻将裂解液吸入离心管中。b. 细胞沉淀或悬浮液:向1-3×107个细胞(沉淀或悬浮液中,体积小于0.1毫升)中加入1毫升的DNAex ZOL试剂。通过轻轻吸取液体使细胞裂解。b. 全血样本:对于不超过100微升的全血,向血液中加入1毫升的DNAex ZOL并轻轻上下移动以裂解细胞。对于超过100微升的全血,离心沉淀细胞并用0.9%氯化钠洗涤。再次沉淀细胞,并在冷(4°C)低渗透溶液中(20mM Tris HCl(pH 8.0),10mM EDTA)中将细胞悬浮。以4,000转/分钟的速度在4°C离心10分钟。丢弃上清液加入1毫升DNAex ZOL(每1-3×107个细胞加入1ml DNAex ZOL)。通过轻轻吸取液体使细胞裂解。4. 植物/动物等组织样本处理:每25-50mg组织样品中加入1ml DNAex ZOL进行均质化和裂解。匀浆结束后室温下10,000×g下离心10分钟。离心后,将所得上清液转移到新鲜的管离心管中。此步骤从裂解物/匀浆中去除不溶性组织片段、RNA和多余的多糖。它仅用于从肝脏、肌肉和大多数含有大量细胞和/或细胞外物质的组织中分离 DNA。II. DNA沉淀1. 通过在用于分离的每1 ml DNAex ZOL 试剂中加入0.5 ml 100% 乙醇,从裂解物/匀浆中沉淀 DNA。通过倒置混合样品并在室温下储存1-3分钟。DNA应迅速以浑浊沉淀物的形式可见。在室温或4°C下以10,000×g离心3-5分钟将沉淀DNA收集。2. 在室温下以10,000×g离心3-5分钟将沉淀DNA收集。通常,在管的底部以白色沉淀的形式获得DNA。有些样品DNA在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后,膜变得更可见。III. DNA清洗1. 用0.8-1.0ml 75%乙醇洗涤DNA沉淀两次。在每次洗涤时,通过倒置试管3-6次将DNA悬浮在乙醇中。2. 室温下以10,000×g离心3-5分钟以使DNA沉降到试管底部,并通过移液除去乙醇。IV. DNA溶解1. 静置5-10分钟待乙醇挥发,无需过份干燥成固体,干燥成固体的DNA沉淀不易溶解2. 加入约50-100μl 配套DNA溶解液可确保DNA沉淀物的完全溶解。DNAex ZOL分离的DNA在Tris缓冲液中的再溶解度较低。因此,强烈建议使用配套溶解液,DNA在其中4°C下可稳定数月,在 -20°C 下可稳定一年以上。从肝脏、肌肉和植物等组织中分离出的 DNA 制剂可能含有一些不溶性物质(主要是多糖),通过在12,000×g离心10分钟除去不溶性物质即可。【注意事项】1. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。2. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
溴化乙锭EB溶液(10000×)
ECOTOP货号:ED-8672-5ml(货期:1-2天)售价:¥240.00
溴化乙锭EB溶液(10000×)
【保存条件】 室温避光储存,有效期两年 【概述】 溴化乙锭染液是检测DNA/RNA最常用的染料。EB是DNA嵌入剂,嵌入在DNA双螺旋碱基之间。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20~30倍。 【操作方法】 1. 琼脂糖凝胶中添加溴化乙锭溶液(10000×):根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每100ml胶液加入10µl 溴化乙锭溶液(10000×)。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后,用相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统),就可以观察到明亮的核酸条带。 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色:按照每100ml的100mM NaCl溶液或水中加入10µl 溴化乙锭溶液(10000×),配制成染色工作液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的溴化乙锭染色工作液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色20-30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后,在紫外灯下即可观察核酸条带。 【注意事项】 1.溴化乙锭为强烈的诱变剂,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

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