【保存条件】 4ºC保存，有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离，但是目前使用的方法繁琐，非特异性且困难。ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子，从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分（即外泌体）从溶液中挤出，从而允许它们在短暂，低速离心后收集。 ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。•为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率• 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体• 避免耗时的超速离心• 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理： 1. 收集细胞培养基。 2. 以2000×g离心细胞培养基30分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中，注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积的ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂。如1ml上清液加入0.5ml提取试剂，或10ml上清液加入5ml提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的上清液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 25-100μl 10ml 100μl-1ml 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存，4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 4. 做少量WB实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离 外泌体做RNA或蛋白质分析，我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 6. 本品仅限用于科研实验。

FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

产品介绍 SDS-PAGE蛋白电泳制胶试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。本试剂盒约可配制30-50块胶。 存储条件 4ºC保存，有效期1年。30% Acr-Bis(29:1)和TEMED 4℃避光保存。凝胶聚合催化剂加水配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效(建议分次称量配制)。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 SDS即Sodium dodecyl sulfate，中文名为十二烷基硫酸钠。常用生化试剂，用途广泛，可以用于SDS-PAGE、细菌碱裂解等。10% SDS溶液为100ml溶液中含有10g SDS，该溶液用超纯水配制，经022μm滤膜过滤处理。 【注意事项】 1. 环境温度较低时，10% SDS溶液会产生大量白色沉淀，可通过37℃水浴促溶。 2. 本产品对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存一年 【概述】 本品已加DAPI，可同时完成细胞核染色和封片，并能减缓荧光淬灭，实验操作更简单，只需在封片时用移液器滴一滴本产品在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞样品： A. 滴一滴抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。 B. 随后即可在荧光显微镜下观察细胞样品。 2. 组织切片： A. 滴一滴抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。 B. 随后即可在荧光显微镜下观察组织切片。 【注意事项】 1. 注意无菌操作，尽量避免污染。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃避光保存，有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)，包括SDS-PAGE胶等，可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide，简称Bis）在催化剂的作用下，通过自由基引发聚合反应，形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关，交联度由Acr与Bis的相对比例决定，调节单体丙烯酰胺与交联剂（Bis）的浓度比例，可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度越低，凝胶的孔径越大，适用于分离较大的分子；Bis的浓度越高，网孔越小，分辨率越高，越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有一定毒性，操作时需小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。