【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining)，也被称作苏木精染色，是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein)，从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合，从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色，与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比，从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。 本试剂盒使用试剂为优化后的Mayer法配方，苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色，细胞浆呈现粉红色或红色。 【使用方法（仅供参考）】 1.样品处理 a.对于石蜡切片： 二甲苯（自备）中脱蜡5-10分钟；换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟；无水乙醇浸泡5分钟；90%乙醇浸泡2分钟；80%乙醇浸泡2分钟；70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。 b.对于冰冻切片： 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。 c.对于培养细胞： 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。 2.苏木素伊红(HE)染色 对于上述处理好的样品： a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，根据组织大小和厚度进行调整)。 b.蒸馏水洗去浮色，用适当的返蓝液浸泡样品10-60s（亦可用自来水中冲洗去多余的染色液，约10分钟）。 c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。 d.选做：根据不同分化液（自备）的分化时间，分化约2-30秒，自来水冲洗10分钟。 e.伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 3.脱水、透明、封片观察 70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色，而细胞浆呈粉红色或红色。 【注意事项】 1. 染色后的分化为选做步骤，但分化后核质着色更清晰。 2. 染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。 3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。 4. 伊红在水和梯度乙醇中会出现脱色，因此建议快速脱水。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，一年有效 【概述】 Gluta电镜固定液(2.5％戊二醛)常用于样本固定，固定速度快，对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本的固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 【操作方法】 1． 根据实验具体要求操作。 2． 取新鲜标本，立即加入Gluta电镜固定液(2.5％戊二醛) 溶液4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。 3． 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2～4mm，一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 2. 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。 3. 取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存，有效期1年 【使用建议（仅供参考）】 1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I/II及细胞核蛋白抽提试剂 NE备用，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合物及PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM（现配现用）。 A: 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。（注：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。） B: 对于悬浮细胞：用预冷的PBS清洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 2. 每20µL细胞沉淀加入200µL添加了PMSF和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂CE I。（对于200万HeLa细胞，其细胞沉淀的体积大约为20µL或40mg。) 3. 最高速剧烈涡旋5-10秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长涡旋时间。) 4. 冰浴10-15分钟。（过程中可适当涡旋2-3次） 5. 加入细胞浆蛋白抽提试剂CE II 10µL。最高速剧烈涡旋5秒，冰浴1分钟。 6. 4℃下12,000-16,000g转速离心5分钟。 7. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。每200万细胞用200µL本产品中的细胞浆蛋白抽提试剂CE I裂解后可获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为2-5mg/ml，不同细胞有所不同。) 8. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清后，加入50µL添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂NE。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。若无法吸尽可使用PBS重悬高速离心后再吸弃上清进行裂解操作。) 9. 将沉淀重悬并在冰上孵育10分钟（过程中可适当涡旋3-5次）。 10. 4℃下12,000-16,000g转速离心10分钟。 12. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-80℃冻存。每200万细胞用50µL本产品中的细胞核蛋白抽提试剂裂解后获得的上清，其细胞核蛋白浓度约为1.2-3.0mg/ml，不同细胞有所不同。 另：新鲜组织细胞核与细胞质蛋白提取 ①　把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I和CE II(例如200µL细胞浆蛋白抽提试剂CE I中加入10µL抽提试剂CEII)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µL组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液(对于不超过30mg的组织样品，仅需加入100µL组织匀浆液)，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。 ②　匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。 ③　4℃条件下1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。) ④　对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照上一个细胞核质蛋白使用说明的步骤3开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤3至步骤12抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白(特别说明:对于起始量为30-60mg的组织样品，后续直接按照步骤3-12操作即可;对于起始量不超过30mg的组织样品，后续步骤3-12中的溶液的用量须减半使用)。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤13中抽提得到的细胞浆蛋白合并。新鲜的肝脏组织用本产品裂解后获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为3-10mg/ml，细胞核蛋白浓度约为3-10mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。 【注意事项】 1. PMSF及蛋白酶抑制剂现配现用，配好后不能长时间储存。 2. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 4℃避光保存12月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物系统，SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】 n 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 n 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间，在最佳条件下可产生长达24小时的光输出 n 稳定的试剂 - 在4℃下1年的试剂盒稳定性 n 更经济的抗体用量： 0.2至1.0μg/ mL一抗（从1 mg / mL原液中1：1000至1：5000稀释） 10至50 ng / mL二级抗体（从1 mg / mL原液中1：20,000至1：100,000稀释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取A:B=1:1混合（如需要1ml发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育2分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3. 发光工作液孵育约2分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后配制新的ECL工作液重新发光和曝光。 4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

【操作方法】 1. 样品处理：a. 组织：将组织在液氮中研磨，磨碎后及时于每50-100mg组织中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，样品体积不应超过RNAEx ZOL Reagent体积的10%（或使用匀浆仪器）。b. 单层细胞：直接在培养皿中裂解细胞，如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量（每10cm2加入1ml RNAEx ZOL Reagent），RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的RNA有DNA污染。c. 悬浮细胞：先低速离心沉淀细胞，弃培养液后加入RNAEx ZOL Reagent（1ml RNAEx ZOL Reagent加入至5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中）。加入RNAEx ZOL Reagent前避免洗涤细胞，这容易导致mRNA降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。可选：一些样品可能需要额外的分享步骤，这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高，如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后，于2-8°C，12000g离心10分钟，移除沉淀不溶物，RNA存于上清中。 2. 相分离a. 将加完RNAEx ZOL Reagent后的样品在室温（15-30°C）静置5分钟，以利于样品核蛋白体完全分离b. 按每1ml RNAEx ZOL Reagent加入0.2ml 氯仿（自备），小心盖好样品管后，剧烈震荡15秒，后置于室温（15-30°C）静置2-3分钟。c. 2-8°C，10000g离心15分钟。离心后，混合物分离为下层（酚-氯仿相）、中间相以及上层无色水相。RNA存在于上层无色水相中，体积约为最初加入RNAEx ZOL Reagent体积的60%左右。RNA分离提取步骤： 1. RNA沉淀a. 将上述水相转移到一个新的管中，并保存有机相（若希望分离DNA或蛋白质）。混合异丙醇从水相中沉淀RNA，每1ml 用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent使用0.5ml 异丙醇，室温（15-30°C）静置10分钟。b. 2-8°C，10000g离心10分钟。离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为RNA沉淀。2. RNA洗涤a. 弃上清。用75%乙醇洗涤RNA沉淀一次，每毫升用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent试剂使用至少1ml 75%乙醇，涡旋混匀后于2-8°C，不超过7500g离心5分钟，弃上清3. 溶解RNAa. 在上述过程结束后，简单干燥RNA沉淀（空气干燥或真空干燥5-10分钟，不要真空离心离心干燥RNA）。重要的是不要让RNA沉淀过于干燥，这将大大降低其溶解度。加入25-200μl无RNase水或0.5% SDS，用吸头吹打几次至溶解，于50-60°C放置10分钟使RNA彻底溶解（注：若后续进行酶学实验，请勿使用0.5% SDS溶液溶解）。溶解后置于-80°C保存。DNA分离提取步骤： 1. DNA沉淀a. 样品加入氯仿分层后，移去上层水相提取RNA，吸取中间层和有机层的DNA用乙醇沉淀。每使用1ml RNAEx ZOL Reagent加入0.3ml 无水乙醇混匀，室温静置2-3分钟，2-8°C不超过2000g离心5分钟以沉淀DNA。 2. DNA洗涤a. 移去苯酚-乙醇上清液（如需要，保存上清用于蛋白质分离，操作见下）。用0.1M的柠檬酸钠溶液（溶于10%乙醇的柠檬酸钠溶液）清洗沉淀的DNA。每毫升用于初始的RNAEx ZOL Reagent试剂添加1ml 溶液。每次清洗时，室温静置30分钟DNA沉淀（间歇混匀），2-8°C 2000g离心5分钟，弃上清。重复一次。b. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每使用1ml RNAEx ZOL Reagent加入1.5-2ml 75%乙醇，室温放置10-20分钟（间歇混匀），2-8°C 2000g离心5分钟，弃上清。c. 室温放置晾干DNA 5-15分钟，用8mM NaOH溶解DNA。从50-70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300-600μl 8mM的NaOH溶液中，浓度常为0.2-0.3μg/μl。注：提取的DNA沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH的pH值为9，NaOH溶液溶解后可用TE、HEPES调节PH。从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g离心10分钟除去。 蛋白质分离操作步骤： 1. 蛋白质沉淀a. 苯酚-乙醇上清液（每1ml RNAEx ZOL Reagent试剂上清体积约0.8ml）中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解RNAEx ZOL Reagent试剂中添加1.5ml 异丙醇，室温静置10分钟，然后2-8°C 12000g离心10分钟以沉淀蛋白质，弃上清。2. 蛋白质洗涤a. 用0.3M盐酸胍溶液（溶于95%乙醇）洗涤蛋白质沉淀3次。每毫升用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent试剂中添加2ml 0.3M盐酸胍溶液。每次洗涤中，室温静置20分钟，2-8°C 7500g离心5分钟，弃上清，重复3次。最后清洗后，加入2ml无水乙醇，漩涡混匀蛋白沉淀，室温静置20分钟，然后2-8°C 7500g离心5分钟以沉淀蛋白质，弃上清。3. 蛋白质溶解a. 干空干燥蛋白质沉淀5-10分钟，用1% SDS溶解蛋白质，反复吹打，50°C温浴至完全溶解，不溶物2-8°C 10000g离心10分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot或者-20°C保存（长期保存建议-80°C） 【注意事项】 1. RNA 酶污染注意事项：a. 提取过程用品均经过去RNA酶处理：玻璃制品可以150 °C烘烤4小时 ，塑料制品可浸泡于0.5M NaOH溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染RNA制备，且同时是RNA酶来源，同时RNAEx ZOL Reagent对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。2. 安全性问题：a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应立即就医3. 存储性问题：a. 实验已证明RNAEx ZOL Reagent室温下可稳定保存12个月，不过依然建议储存于2-8°C以保证最佳性能，尽量避光保存。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 无酶无菌水是超纯水经DEPC处理后，再高压灭菌而得到的不含DNA酶或RNA酶的无菌水。经检测无核酸酶和蛋白酶活性，可用于cDNA合成、体外转录、RNA提取等对核酸酶敏感的分子生物学试验和相关产品的稀释或溶解。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 干粉及溶解液4℃避光保存，有效期12个月；制成溶液后-20℃分装保存，有效期半年。 【概述】 10%PAGE胶凝固剂即为10%APS，常用于PAGE胶的配制，建议现用现溶。4℃下可保存一周，其在室温下不稳定，不建议长期放置于室温。-20℃分装保存可最大限度保证后续产品使用效果。 【使用建议】 每管干粉加入1ml溶解液，吹打混匀，将干粉溶解成10%（w/v)溶液即可。 制成溶液后须-20℃避光保存，有效期约半年；4℃下可保存一周，建议现用现溶。 【注意事项】 1. PAGE胶凝聚的速度与温度及光照关系密切，可通过适当调节APS的用量，控制在不同的环境下凝胶凝聚的速度。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

伊文思蓝染色液（0.5%）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8435 Evans Blue Stain Solution 0.5% 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小和血浆白蛋白相近，而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞，但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至1分钟，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。 2. 脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。 3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。 4. 1000g离心20～30 min或2000g离心15min。 5. 取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性，请小心防护。 2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中，伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 SafeView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，可与核酸结合后能产生很强的荧光信号。 【操作方法】 1. 琼脂糖凝胶中添加SafeView：根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每100ml胶液加入10µl SafeView (比例10000:1)。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后，用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)，就可以观察到明亮的核酸条带。 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色：按照每100ml的100mM NaCl溶液或水中加入10µl SafeView，配制成染色工作液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的SafeView染色工作液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色20-30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察核酸条带。 【注意事项】 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 2. SafeView相对EB毒性较小，但为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。