【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理（标准操作建议0.8-5ml尿液）： 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻，请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态，然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管，注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀，充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 注：重要！如果在离心过程中使用固定角转子，则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 3. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 ECOTOP尿液外泌体提取试剂可以从尿样品中快速高效地富集完整的外泌体。 •为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率 • 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体 • 避免耗时的超速离心 • 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理（标准操作建议0.8-5ml尿液）： 1. 将尿液样本从储存库中取出并放在冰上。如果样品被冷冻，请在25°C至37°C下解冻样品 2. 水浴直到完全液态，然后放在冰上直至使用。 3. 4°C条件下将尿样以2000×g离心30分钟以去除细胞和碎片。 4. 将含有澄清尿液的上清液转移到新的离心管，注意不要吸到管底的沉淀。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入1倍体积的ECOTOP尿液外泌体提取试剂。如1ml上清尿液加入1ml尿液外泌体提取试剂。 2. 通过倒置离心管、涡旋或上下移液直到溶液均匀，充分混合尿液/试剂混合物。。 3. 将混匀好的样品室温孵育1小时。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 注：重要！如果在离心过程中使用固定角转子，则外泌体会沿着转子中试管的外表面内侧分布。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的尿液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 20-50μl 5ml 100-300μl 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 尿液上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 2. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 3. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 室温避光储存，有效期1年 【概述】 结晶紫(Crystal violet) 又称甲紫、龙胆紫，属于碱性染料，可以和细胞核中的DNA结合，产生细胞核染色，从而将细胞核染成紫色。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。 【使用建议】 如用作细胞核染色，请根据需要使用PBS将本产品稀释使用，细胞核染色建议浓度0.1%，染色时间一般为10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 建议使用1-2个样品进行预实验。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 结晶紫对人体有害，请注意适当防护。

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃保存3个月，-20℃保存一年 【使用建议（仅供参考）】 选项A：使用基于试剂的方法分离线粒体 1. 使用前立即添加蛋白酶抑制剂至试剂A和试剂C中;仅将抑制剂添加到用于实验的试剂量中，而不是添加到储备溶液中。 2. 在2.0mL微量离心管中以~850×g离心2分钟收获沉淀2×107个细胞，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A，以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 选项B：50-200mg组织分离线粒体 1. 取50-200mg组织在PBS溶液中切碎，使用匀浆机中破碎以破碎组织关联，应减少细胞破裂。 注意：如组织较硬如心脏组织，可50-200毫克的硬组织（心脏）在含有0.3毫克/毫升胰蛋白酶的PBS溶液中切成小块，并在冰上孵化三分钟。孵育后，样品在4°C的温度下以700×g离心一分钟。然后仔细丢弃上清液，并收集组织颗粒。添加800微升含有4毫克/毫升BSA的PBS溶液，并使用Polytron或Dounce均质器研磨组织样品，以破坏组织关联。 2. 组织匀质物在4°C下以1000×g离心3分钟，小心地取出并丢弃上清液。 3. 加入800μL线粒体分离试剂A（可加入适量BSA至终浓度为4mg/ml），以中速涡旋5秒，并将试管在冰上孵育2分钟。 注意：孵育时间不要超过 2 分钟以避免损害线粒体完整性。 4. 加入10μL线粒体分离试剂B，以最大速度涡旋5秒。 5. 将试管在冰上孵育5分钟，孵育过程中每分钟以最大速度涡旋数秒。 6. 加入800μL线粒体分离试剂C倒置试管数次混合（不要涡旋）。 7. 将离心管在4°C下以700×g离心管离心10分钟。 8. 将上清液转移到新的2.0 mL离心管中，并在4°C下以12,000×g离心15分钟。 注意：如需获得更纯的线粒体部分，减少>50%溶酶体和过氧化物酶体污染物，更改为以3000×g离心15分钟。 9. 将上清液（胞质部分）转移到新管中，沉淀含有分离的线粒体。 10. 向沉淀中加入 500μL线粒体分离试剂C，然后以12,000×g离心5分钟，弃去上清液，沉淀即为纯化后得到的线粒体。 11. 在下游处理之前将线粒体沉淀保持在冰上。冻融可能会损害线粒体的完整性。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

【保存条件】 4℃避光保存12月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物系统，SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】 n 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 n 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间，在最佳条件下可产生长达24小时的光输出 n 稳定的试剂 - 在4℃下1年的试剂盒稳定性 n 更经济的抗体用量： 0.2至1.0μg/ mL一抗（从1 mg / mL原液中1：1000至1：5000稀释） 10至50 ng / mL二级抗体（从1 mg / mL原液中1：20,000至1：100,000稀释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取A:B=1:1混合（如需要1ml发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育2分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3. 发光工作液孵育约2分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后配制新的ECL工作液重新发光和曝光。 4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

【保存条件】 常温保存,至少稳定 12 个月 【概述】 FastBlot 快速蛋白电泳转膜液是一种改良的 Towbin 经典缓冲液，这种专有的配方大大提高了转移速度，而不会产生过多的热量而影响蛋白质。可用于半干转膜仪将 5-300kDa 蛋白从聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）快速半干转移至硝酸纤维素膜或 PVDF 膜。 【操作方法】 1. 使用前用去离子水将 5×溶液稀释至 1×工作液：例如将 200ml 5×FastBlot 快速蛋白电泳转膜液加入 600ml 去离子水中混匀，再加入 200ml 甲醇或乙醇充分混匀。（使用前预冷更优） 2. 将 PVDF 膜使用甲醇提前浸泡 3-5 分钟至透明状态，（NC 膜无需提前浸泡) 3. 按操作正确安装您的转膜设备并准备转膜。 4. 转膜条件（参考） 转膜类型 分子量 2 块mini 胶或 1 块midi 胶 1 块 mini 胶 转膜时间 1.5mm 凝胶 任意 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 10 分钟 高分子量蛋白 >150KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 10 分钟 低分子量蛋白 <30KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 5 分钟 其它分子量蛋白 5-150KD 2.5A,up to 25V 1.3A,up to 25V 7 分钟 注：若使用使用Biorad Trans-blot Turbo Transfer System(Cat: 1704150)设备，可直接替代其中转膜液。 【注意事项】 1. 本品需添加甲醇或乙醇后使用，使用过程中注意相应毒性的防护。 2. 转膜条件为参考条件，具体以实际实验操作优化标准为准。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 常温保存，有效期1年 【概述】 本产品主要用于将10-300kDa蛋白从聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）快速半干转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜。 快速：高离子强度配方与兼容的快速半干印迹系统一起使用时，可实现5-10分钟的蛋白质转移 安全无甲醇/乙醇：本品可直接使用，不需添加有毒甲醇或乙醇。 【操作方法】 1. 使用前用去离子水将5×FastBlot快速半干法转膜液稀释至1×工作液，例如将200ml 5×FastBlot快速半干法转膜液加入800ml去离子水中混匀。 2. PVDF膜需提前用甲醇浸泡活化。 3. 半干转膜设置条件如下，将电压调至最大25V，稳流转膜5-10分钟： 胶类型 转膜面积 电流（A） 1块迷你胶 60cm2 1.3A 2块迷你胶或1块中等胶 120cm2 2.5A 3块迷你胶 180cm2 3.8A 4块迷你胶或2块中等胶 240cm2 5.0A 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存 24 个月 【概述】 PathSave 细胞保存液是一种可靠、简单且经济高效的单层细胞学溶液。细胞将被完美保 存，具有可明显分辨的细胞核、细胞质和完整的诊断学细节，可用于随后的免疫学、遗传学 或细胞学分析。可适用的标本包括痰液、来自消化道（包括食道、 胃、胰腺、胆管和胰管） 的支气管肺泡灌洗标本、尿液和刷洗物等。 【产品特点】 . 样品在保存液中在室温下可稳定保存 4 周，在 2-8°C 条件下可保存 3-6 个月 . 操作简单，收集的细胞样本浸没到溶液中即可 . 可保存样品中 DNA 的稳定 . 保持蛋白稳定性用于后续免疫学等研究 【使用建议】 1. 收集细胞并转移到含保存液的管中，保证组织被保存液完全覆盖（运输空间要考虑组织 贴壁可以增加保存液体积）。 2. 在室温下储存或运输样品。 3. 在运输/存储结束时，取出样本并直接与下游处理应用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究。 2. 本品含少量乙醇，使用时注意防护。

【保存条件】 室温保存 24 个月 【概述】 PathSave 细胞保存液是一种可靠、简单且经济高效的单层细胞学溶液。细胞将被完美保 存，具有可明显分辨的细胞核、细胞质和完整的诊断学细节，可用于随后的免疫学、遗传学 或细胞学分析。可适用的标本包括痰液、来自消化道（包括食道、 胃、胰腺、胆管和胰管） 的支气管肺泡灌洗标本、尿液和刷洗物等。 【产品特点】 . 样品在保存液中在室温下可稳定保存 4 周，在 2-8°C 条件下可保存 3-6 个月 . 操作简单，收集的细胞样本浸没到溶液中即可 . 可保存样品中 DNA 的稳定 . 保持蛋白稳定性用于后续免疫学等研究 【使用建议】 1. 收集细胞并转移到含保存液的管中，保证组织被保存液完全覆盖（运输空间要考虑组织 贴壁可以增加保存液体积）。 2. 在室温下储存或运输样品。 3. 在运输/存储结束时，取出样本并直接与下游处理应用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究。 2. 本品含少量乙醇，使用时注意防护。