【保存条件】 -20℃储藏，有效期1年。 【概述】 嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。 该溶液经0.22um滤膜过滤除菌，可直接使用。 【使用建议】 1. 哺乳动物细胞建议使用浓度为1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。 2. LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，建议使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。 【注意事项】 1. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期1年 【概述】 HEPES 即羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的 pH范围。有效缓冲范围为pH6.8-8.2。常用于配制蛋白提取缓冲液、细胞培养用缓冲液等。 HEPES 用于细胞培养时使用终浓度为10-25mM，在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值。ECOTOP生产的 HEPES 缓冲液均经过无菌处理，可直接用于细胞培养。4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. HEPES溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4˚C保存，12个月有效 【概述】 格氏平衡盐溶液 (GBSS) 是一种磷酸氢盐缓冲的细胞悬浮液和洗涤液，具有独特盐形式组合的完整平衡盐溶液，包含与EBSS、HBSS和DPBS相同的五种基本离子。 本溶液经无菌处理，含钙、含镁、无酚红，pH为7.4。 【组分及浓度】 组分 浓度 氯化钙 1.496mM 氯化钾 4.963mM 磷酸二氢钾 0.22mM 氯化镁 1.032mM 硫酸镁 0.284mM 氯化钠 0.1368M 碳酸氢钠 2.7mM 磷酸氢二钠 0.8453mM D-葡萄糖 5.55mM 【注意事项】 1. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 超纯水水用途广泛，可用于细胞培养相关溶液配制和分子生物学实验中的普通PCR体系构建等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 超纯水水用途广泛，可用于细胞培养相关溶液配制和分子生物学实验中的普通PCR体系构建等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 PB Buffer即磷酸缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲溶液,用于分子克隆及蛋白相关研究等，主要成分为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠。 本产品浓度为0.1M，pH值为7.4，经无菌处理。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml） 5mg/ml潮霉素B加入体积（ml） 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 D-PBS（Dulbecco’s phosphate buffered solution）即杜氏磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为10×母液，经过除菌处理。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【使用建议】 请在无菌环境中将10×DBS溶液稀释成1×使用，如100ml 10×DBS溶液加入900ml无菌ddH2O稀释。 【注意事项】 1. 10×D-PBS 溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2. 用于存放10×D-PBS 溶液的容器应经过灭菌处理。 3. 10×D-PBS 溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 4. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml） 5mg/ml潮霉素B加入体积（ml） 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml） 5mg/ml潮霉素B加入体积（ml） 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。