【保存条件】 4℃保存，一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素，可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌，真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的，在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。 一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。 1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。 2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度（μg/mL） 培养基体积（ml） 5mg/ml潮霉素B加入体积（ml） 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3）第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4）接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5）按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1）转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。 注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2）每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3）筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。 4）挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5）之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。

【保存条件】 -20℃保存一年 【概述】 细胞培养基中有时加入适量浓度的抗生素，可以有效防止微生物的污染。本品青霉素的含量为10kU/ml，链霉素的含量为10mg/ml。该溶液用0.9%氯化钠配制，经0.22μm滤膜过滤除菌，使用时按照100倍稀释使用即可。 【使用建议（仅供参考）】 1. 在无菌的细胞培养液中直接添加：按照每500ml细胞培养液添加5ml的比例加入青链霉素混合液(100×)，混匀即可使用。 2. 配制非无菌细胞培养液时加入，然后再过滤除菌：配制细胞培养液时按照每配制1L细胞培养液加入10ml 的比例加入青链霉素混合液(100×)，配制完成后过滤除菌即可使用。 【注意事项】 1. 尽量减少反复冻融的次数。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20ºC保存2年 【概述】 √ Ecotop品牌高效转染试剂（GO3000 HiTrans Reagent），适用于真核哺乳动物细胞转染，有毒性低、转染效率高等特点。 √ 适用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela等哺乳动物细胞，转染效率可高达90%以上。通常293细胞转染效率可以高达90%以上。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合用该试剂转染，但效率比293细胞要略低一些。 √ 应用：细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV病毒包装、逆转录病毒包装 √ 本试剂经过0.22μm过滤器除菌处理，可直接使用。 【操作方法】 1. 对于贴壁细胞（以下均以6孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）： a. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后1-2天内长到70-90%。 b. 在转染前1-2小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。 c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比1：3加入转染试剂6~12μl（如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl）。 d. 混匀后，室温孵育3-5分钟。 e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM（若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640，具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置10-15分钟。 f. 后均匀滴加到整个6孔板内（加入前吸出原培养板中500μl培养基），并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 g. 在转染后4-6小时左右换液，更换为2ml新鲜的完全培养液，继续培养。 h. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 2. 对于悬浮细胞： a. 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。 b. 按照上面的步骤c)、d)、e）制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。 c. 每106个细胞的沉淀，用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮，室温放置15-20分钟。 d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物，混匀。 e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在4-6小时后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。 g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 【效果图】 【各种类细胞转染效率（仅供参考）】 细胞种类 中文名称 转染效率 HEK293 人胚肾细胞 90%-95% 293-T 人胚肾细胞 90%-95% CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90% U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90% Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80% COS7 猴SV40转化肾细胞 70%-80% HepG2 人源肝癌细胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70% 胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%

【保存条件】 -20℃保存,有效期2年 【概述】 0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA)含0.25%胰酶、EDTA和酚红，pH值为7.2-7.8。该消化液经过过滤除菌，可以直接用于培养细胞的消化，或者一些组织的消化。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞的消化：a.吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。b.加入少量0.25%胰酶细胞消化液(含EDTA)，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。c.显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。d.如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。2. 组织的消化：a.不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。 【注意事项】 1. 胰酶消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。 2. 注意无菌操作，尽量避免污染。 3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液，经过除菌处理，可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1.PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2.PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3.为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4-8℃保存，有效期1年 【概述】 SBF模拟体液是一种离子浓度接近人体血浆的亚稳定溶液。该产品经过过滤除菌处理，在36.5℃下pH为7.4 。 表一.人类血浆和SBF模拟体液的离子浓度 离子浓度 SBF模拟体液 人类血浆 Na+ 142.0 142.0 K+ 5.0 5.0 Mg2+ 1.5 1.5 Ca2+ 2.5 2.5 Cl- 148.8 103.0 HCO3- 4.2 27.0 HPO42- 1.0 1.0 SO42- 0.5 0.5 【注意事项】 1. SBF模拟体液（无菌）为无菌溶液，如有无菌要求请注意无菌操作。 2. 如果该产品在低温储存过程中出现沉淀，请勿再次使用。 3. 该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 4. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期1年 【概述】 HEPES 即羟乙基呱嗪乙硫磺酸（N’-a-hydroxythylpiperazine-N’-ethanesulfanic acid ）是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的 pH范围。有效缓冲范围为pH6.8-8.2。常用于配制蛋白提取缓冲液、细胞培养用缓冲液等。 HEPES 用于细胞培养时使用终浓度为 10-25mM， 在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的 pH 值。ECOTOP生产的 HEPES 缓冲液均经过无菌处理，可直接用于细胞培养。4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1. HEPES溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 无菌去离子水用途广泛，可用于溶液的配制和分子生物学实验中的普通PCR体系构建等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 D-PBS（Dulbecco’s phosphate buffered solution）即杜氏磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠. 本产品为1×工作液，经过除菌处理，可直接使用。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【注意事项】 1.D-PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2.D-PBS溶液在使用过程中应该避免微生物污染。 3.为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温保存，有效期1年【概述】 PBS（phosphate buffered solution）即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、氯化钾、磷酸氢二钠以及氯化钠。 本产品为20×母液，未经过除菌处理。 4℃保存可延长产品保质期，长期不用建议低温保存。 【使用建议】 请将20×PBS溶液稀释成1×使用，如50ml 10×PBS溶液加入950ml ddH2O稀释。 【注意事项】 1.PBS溶液在低温情况下可能会产生沉淀。如果发现有沉淀产生，请置于37℃水浴至完全溶解后再使用。 2.为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。