FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

FFPE Tissue Total Protein Extraction Kit (Western Blot & RPA)

产品介绍 SDS-PAGE蛋白电泳制胶试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。本试剂盒约可配制30-50块胶。 存储条件 4ºC保存，有效期1年。30% Acr-Bis(29:1)和TEMED 4℃避光保存。凝胶聚合催化剂加水配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效(建议分次称量配制)。

【保存条件】 4℃保存，有效期1年 【概述】 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。 【使用方法】 1. 蛋白标准液的准备 a. 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。 b. 按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml的蛋白标准。 编号 稀释液体积 标准品体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 2. 蛋白浓度测定 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入250µl G250染色液。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。 【注意事项】 1. 本品BSA因每次使用量较小，推荐分装使用。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系） 3. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。 4. 将G250染色液回复至室温后使用，有利于提高检测灵敏度。 5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃保存，有效期1年 【概述】 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。 【使用方法】 1. 蛋白标准液的准备 a. 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。 b. 按照下表配制0、0.125、0.25、0.5、0.75、1、1.5mg/ml蛋白标准。每次稀释时注意充分混匀。如果有必要可以增加设置 0.0625mg/ml的蛋白标准。 编号 稀释液体积 标准品体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 2. 蛋白浓度测定 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入250µl G250染色液。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品中的蛋白浓度。 【注意事项】 1. 本品BSA因每次使用量较小，推荐分装使用。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系） 3. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。 4. 将G250染色液回复至室温后使用，有利于提高检测灵敏度。 5. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 SDS即Sodium dodecyl sulfate，中文名为十二烷基硫酸钠。常用生化试剂，用途广泛，可以用于SDS-PAGE、细菌碱裂解等。10% SDS溶液为100ml溶液中含有10g SDS，该溶液用超纯水配制，经022μm滤膜过滤处理。 【注意事项】 1. 环境温度较低时，10% SDS溶液会产生大量白色沉淀，可通过37℃水浴促溶。 2. 本产品对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。 3. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存一年 【概述】 本品已加DAPI，可同时完成细胞核染色和封片，并能减缓荧光淬灭，实验操作更简单，只需在封片时用移液器滴一滴本产品在样品上，盖上盖玻片即可完成操作。 【使用建议（仅供参考）】 1. 贴壁细胞样品： A. 滴一滴抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。 B. 随后即可在荧光显微镜下观察细胞样品。 2. 组织切片： A. 滴一滴抗荧光淬灭封片剂（含DAPI）于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。 B. 随后即可在荧光显微镜下观察组织切片。 【注意事项】 1. 注意无菌操作，尽量避免污染。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作