【保存条件】 4℃避光保存，有效期1年 【概述】 30% Acr-Bis Solution (29:1) 即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液，其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。 30% Acr-Bis Solution (29:1) 常用于配制丙烯酰胺凝胶(PAGE胶)，包括SDS-PAGE胶等，可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide，简称Bis）在催化剂的作用下，通过自由基引发聚合反应，形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度所决定。 聚合链的长度与丙烯酰胺浓度有关，交联度由Acr与Bis的相对比例决定，调节单体丙烯酰胺与交联剂（Bis）的浓度比例，可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度越低，凝胶的孔径越大，适用于分离较大的分子；Bis的浓度越高，网孔越小，分辨率越高，越有利于分离较小的分子。 【注意事项】 1. 本产品对人体有一定毒性，操作时需小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining)，也被称作苏木精染色，是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein)，从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料，在水中解离成带负电荷的阴离子，可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合，从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色，与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比，从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。 本试剂盒使用试剂为优化后的Mayer法配方，苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色，细胞浆呈现粉红色或红色。 【使用方法（仅供参考）】 1.样品处理 a.对于石蜡切片： 二甲苯（自备）中脱蜡5-10分钟；换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟；无水乙醇浸泡5分钟；90%乙醇浸泡2分钟；80%乙醇浸泡2分钟；70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。 b.对于冰冻切片： 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。 c.对于培养细胞： 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。 2.苏木素伊红(HE)染色 对于上述处理好的样品： a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，根据组织大小和厚度进行调整)。 b.蒸馏水洗去浮色，用适当的返蓝液浸泡样品10-60s（亦可用自来水中冲洗去多余的染色液，约10分钟）。 c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。 d.选做：根据不同分化液（自备）的分化时间，分化约2-30秒，自来水冲洗10分钟。 e.伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 3.脱水、透明、封片观察 70%乙醇10秒，80%乙醇10秒，90%乙醇10秒，无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞核呈蓝色，而细胞浆呈粉红色或红色。 【注意事项】 1. 染色后的分化为选做步骤，但分化后核质着色更清晰。 2. 染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。 3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。 4. 伊红在水和梯度乙醇中会出现脱色，因此建议快速脱水。 5. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，一年有效 【概述】 Gluta电镜固定液(2.5％戊二醛)常用于样本固定，固定速度快，对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好，经常用于电镜标本的固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 【操作方法】 1． 根据实验具体要求操作。 2． 取新鲜标本，立即加入Gluta电镜固定液(2.5％戊二醛) 溶液4℃固定1～4h，稍大标本应适当延长固定时间。 3． 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 组织取材的厚度不同，固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2～4mm，一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 2. 固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。 3. 取出新鲜组织后，应及时固定。无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 建议分装冻存，避免反复冻融，-20℃避光保存，有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解，并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感，优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料：蓝色（溴酚蓝），用于跟踪电泳的进度；粉红色（pyronin Y），用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液，并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。 3. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白变性。 4. 冷却至室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀，使用前请确保溶液完全复溶混匀，有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右， 胶浓度为12%时，约在20kd左右，胶浓度为15%时，大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言，吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶（例如15%）中，吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20℃保存，有效期1年 【使用建议（仅供参考）】 1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I/II及细胞核蛋白抽提试剂 NE备用，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合物及PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM（现配现用）。 A: 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。（注：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。） B: 对于悬浮细胞：用预冷的PBS清洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 2. 每20µL细胞沉淀加入200µL添加了PMSF和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂CE I。（对于200万HeLa细胞，其细胞沉淀的体积大约为20µL或40mg。) 3. 最高速剧烈涡旋5-10秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长涡旋时间。) 4. 冰浴10-15分钟。（过程中可适当涡旋2-3次） 5. 加入细胞浆蛋白抽提试剂CE II 10µL。最高速剧烈涡旋5秒，冰浴1分钟。 6. 4℃下12,000-16,000g转速离心5分钟。 7. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。每200万细胞用200µL本产品中的细胞浆蛋白抽提试剂CE I裂解后可获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为2-5mg/ml，不同细胞有所不同。) 8. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清后，加入50µL添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂NE。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。若无法吸尽可使用PBS重悬高速离心后再吸弃上清进行裂解操作。) 9. 将沉淀重悬并在冰上孵育10分钟（过程中可适当涡旋3-5次）。 10. 4℃下12,000-16,000g转速离心10分钟。 12. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-80℃冻存。每200万细胞用50µL本产品中的细胞核蛋白抽提试剂裂解后获得的上清，其细胞核蛋白浓度约为1.2-3.0mg/ml，不同细胞有所不同。 另：新鲜组织细胞核与细胞质蛋白提取 ①　把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I和CE II(例如200µL细胞浆蛋白抽提试剂CE I中加入10µL抽提试剂CEII)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µL组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液(对于不超过30mg的组织样品，仅需加入100µL组织匀浆液)，并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。 ②　匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。 ③　4℃条件下1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。) ④　对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照上一个细胞核质蛋白使用说明的步骤3开始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤3至步骤12抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白(特别说明:对于起始量为30-60mg的组织样品，后续直接按照步骤3-12操作即可;对于起始量不超过30mg的组织样品，后续步骤3-12中的溶液的用量须减半使用)。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤13中抽提得到的细胞浆蛋白合并。新鲜的肝脏组织用本产品裂解后获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为3-10mg/ml，细胞核蛋白浓度约为3-10mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。 【注意事项】 1. PMSF及蛋白酶抑制剂现配现用，配好后不能长时间储存。 2. 尽量减少反复冻融的次数，以免效率下降。

【保存条件】 室温避光保存，有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成， 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高，检测浓度下限达到25µg/ml，最小检测蛋白量达到0.5µg，待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液： 依据样品数量，将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液，并充分混匀。 注：配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀，观察是否析出结晶，如若析出结晶，可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品： 蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质，也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存，请完全融化并混匀后使用。具体如下表： 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl，需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度，也可以在2小时内测定，2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值（多孔则为平均OD）为纵坐标 c. 建立线性关系，获得公式（如右图中所示(本产品实际检测)，若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151，计算得浓度x=0.37mg/ml） 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同，得到OD有区别为正常现象（保证数据呈线性关系）。 3. 蛋白标准液（5mg/ml）收到后尽快分装，避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶，可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板（如普通细胞培养板）检测，最佳波长为595nm。

【保存条件】 4℃避光保存12月 【概述】 超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。 用于 HRP 标记抗体的 Western Blot 和 HRP 标记探针的核酸杂交。由于采用了独特的发光底物系统，SuperStar ECL超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂（具有极高灵敏度和高信噪比）；可在日光灯下进行发光操作；发光迅速，荧光可使 X 光胶片感光达 12 小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测；可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000～1:10000)， 极其节省抗体。 【特点】 n 飞克级灵敏度 - 在硝酸纤维素或PVDF膜上检测低至飞克量的目标蛋白量 n 高信号稳定性 - 孵育印迹在关键的4小时时间内提供稳定的信号持续时间，在最佳条件下可产生长达24小时的光输出 n 稳定的试剂 - 在4℃下1年的试剂盒稳定性 n 更经济的抗体用量： 0.2至1.0μg/ mL一抗（从1 mg / mL原液中1：1000至1：5000稀释） 10至50 ng / mL二级抗体（从1 mg / mL原液中1：20,000至1：100,000稀释） 【操作方法】 1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤。注意用 HRP 标记 lgG 或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。 2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取A:B=1:1混合（如需要1ml发光液则取500ul ECL A液和500ul ECL B液混合），放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 3. 用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.125ml发光工作液/cm2 膜)中，与发光工作液充分接触。室温孵育2分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将 膜剪小但勿降低发光液用量。 4. 用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。 5. 打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。 6. 暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。 【注意事项】 1. 步骤 1～5 可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 3. 发光工作液孵育约2分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1-10 小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后配制新的ECL工作液重新发光和曝光。 4. 由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000～1:4000，二抗 1:2000～1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。

【保存条件】 -20ºC保存2年 【概述】 √ Ecotop品牌高效转染试剂（GO3000 HiTrans Reagent），适用于真核哺乳动物细胞转染，有毒性低、转染效率高等特点。 √ 适用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela等哺乳动物细胞，转染效率可高达90%以上。通常293细胞转染效率可以高达90%以上。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合用该试剂转染，但效率比293细胞要略低一些。 √ 应用：细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV病毒包装、逆转录病毒包装 √ 本试剂经过0.22μm过滤器除菌处理，可直接使用。 【操作方法】 1. 对于贴壁细胞（以下均以6孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）： a. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后1-2天内长到70-90%。 b. 在转染前1-2小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。 c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比1：3加入转染试剂6~12μl（如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl）。 d. 混匀后，室温孵育3-5分钟。 e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM（若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640，具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置10-15分钟。 f. 后均匀滴加到整个6孔板内（加入前吸出原培养板中500μl培养基），并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 g. 在转染后4-6小时左右换液，更换为2ml新鲜的完全培养液，继续培养。 h. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 2. 对于悬浮细胞： a. 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。 b. 按照上面的步骤c)、d)、e）制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。 c. 每106个细胞的沉淀，用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮，室温放置15-20分钟。 d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物，混匀。 e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在4-6小时后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。 g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 【效果图】 【各种类细胞转染效率（仅供参考）】 细胞种类 中文名称 转染效率 HEK293 人胚肾细胞 90%-95% 293-T 人胚肾细胞 90%-95% CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90% U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90% Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80% COS7 猴SV40转化肾细胞 70%-80% HepG2 人源肝癌细胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70% 胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%

【保存条件】 干粉及溶解液4℃避光保存，有效期12个月；制成溶液后-20℃分装保存，有效期半年。 【概述】 10%PAGE胶凝固剂即为10%APS，常用于PAGE胶的配制，建议现用现溶。4℃下可保存一周，其在室温下不稳定，不建议长期放置于室温。-20℃分装保存可最大限度保证后续产品使用效果。 【使用建议】 每管干粉加入1ml溶解液，吹打混匀，将干粉溶解成10%（w/v)溶液即可。 制成溶液后须-20℃避光保存，有效期约半年；4℃下可保存一周，建议现用现溶。 【注意事项】 1. PAGE胶凝聚的速度与温度及光照关系密切，可通过适当调节APS的用量，控制在不同的环境下凝胶凝聚的速度。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

伊文思蓝染色液（0.5%）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8435 Evans Blue Stain Solution 0.5% 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小和血浆白蛋白相近，而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞，但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至1分钟，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。 2. 脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。 3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。 4. 1000g离心20～30 min或2000g离心15min。 5. 取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性，请小心防护。 2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中，伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。