【保存条件】 -20ºC保存2年 【概述】 √ Ecotop品牌高效转染试剂（GO3000 HiTrans Reagent），适用于真核哺乳动物细胞转染，有毒性低、转染效率高等特点。 √ 适用于：293T/293A/HEK293/CHO/Hela等哺乳动物细胞，转染效率可高达90%以上。通常293细胞转染效率可以高达90%以上。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合用该试剂转染，但效率比293细胞要略低一些。 √ 应用：细胞瞬时转染、慢病毒包装、腺病毒包装、AAV病毒包装、逆转录病毒包装 √ 本试剂经过0.22μm过滤器除菌处理，可直接使用。 【操作方法】 1. 对于贴壁细胞（以下均以6孔板为例，其它培养皿或培养板请根据相应面积换算）： a. 将细胞培养于培养皿或培养板内，通常在铺板后1-2天内长到70-90%。 b. 在转染前1-2小时，吸去细胞培养液，更换为新鲜的不含抗生素的完全培养液2ml。 c. 取2-4μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20μl，若有多种质粒请混匀)，以质量体积比1：3加入转染试剂6~12μl（如2μg待转染的质粒DNA加入转染试剂6μl）。 d. 混匀后，室温孵育3-5分钟。 e. 把DNA-转染试剂混合物中加入500μl opti-MEM（若无opti-MEM可使用无血清无双抗的DMEM或1640，具体根据转染细胞使用的培养基）,充分混匀后静置10-15分钟。 f. 后均匀滴加到整个6孔板内（加入前吸出原培养板中500μl培养基），并置于含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 g. 在转染后4-6小时左右换液，更换为2ml新鲜的完全培养液，继续培养。 h. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 2. 对于悬浮细胞： a. 离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤一次。 b. 按照上面的步骤c)、d)、e）制备DNA-转染试剂-optiMEM混合物。 c. 每106个细胞的沉淀，用500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物重新悬浮，室温放置15-20分钟。 d. 在一个6孔板孔内加入1.5ml完全培养液，然后加入来自上一步的细胞-500微升DNA-转染试剂-optiMEM混合物，混匀。 e. 在含5%二氧化碳的37ºC细胞培养箱内培养。 f. 根据实验要求和转染试剂对于不同细胞的毒性不同，在4-6小时后离心收集细胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培养 液重新悬浮细胞，继续培养。 g. 通常在转染约24-48小时后就可以检测到转染基因的表达。 【效果图】 【各种类细胞转染效率（仅供参考）】 细胞种类 中文名称 转染效率 HEK293 人胚肾细胞 90%-95% 293-T 人胚肾细胞 90%-95% CHO-K1 仓鼠卵巢细胞 80%-90% U251 人源神经胶质瘤细胞 80%-90% Hela 人源宫颈癌细胞 70%-80% COS7 猴SV40转化肾细胞 70%-80% HepG2 人源肝癌细胞 70%-80% NIH/3T3 小鼠胚胎成纤维细胞 60%-70% 胶质瘤干细胞 人源胶质瘤干细胞 60%-70% Patu8988 人源胰腺癌细胞 60%-70% U2OS 人源骨肉瘤细胞 60%-70%

【保存条件】 干粉及溶解液4℃避光保存，有效期12个月；制成溶液后-20℃分装保存，有效期半年。 【概述】 10%PAGE胶凝固剂即为10%APS，常用于PAGE胶的配制，建议现用现溶。4℃下可保存一周，其在室温下不稳定，不建议长期放置于室温。-20℃分装保存可最大限度保证后续产品使用效果。 【使用建议】 每管干粉加入1ml溶解液，吹打混匀，将干粉溶解成10%（w/v)溶液即可。 制成溶液后须-20℃避光保存，有效期约半年；4℃下可保存一周，建议现用现溶。 【注意事项】 1. PAGE胶凝聚的速度与温度及光照关系密切，可通过适当调节APS的用量，控制在不同的环境下凝胶凝聚的速度。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

伊文思蓝染色液（0.5%）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8435 Evans Blue Stain Solution 0.5% 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小和血浆白蛋白相近，而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞，但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至1分钟，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。 2. 脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。 3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。 4. 1000g离心20～30 min或2000g离心15min。 5. 取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性，请小心防护。 2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中，伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3M Sodium Acetate Solution, pH 5.2

Sodium Chloride Solution, 5mol/L，Sterilize

Sodium Chloride Solution, 1mol/L，Sterilize

2M氯化镁溶液使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8361 Magnesium Chloride Solution, 2mol/L 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 2M氯化镁溶液由六水氯化锰镁和去离子水组成，该溶液经高温高压灭菌处理，可直接用于溶液的配制和细胞培养等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Potassium Chloride Solution, 3mol/L

Calcium Chloride Solution, 2.5mol/L, Sterilize

Calcium Chloride Solution, 1mol/L, Sterilize