【保存条件】 4℃保存，有效期1年 【概述】 RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP和ELISA等。 RIPA的本意是Radio Immuno Precipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度RIPA裂解液。 【使用建议】 如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量，取每1ml RIPA加入10μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。 1. 样品前处理： a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。 b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。 c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 2. 后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 为保证最佳的使用效果，请尽量避免过多的反复冻融，可分装后使用。 4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行，根据需要添加不同抑制剂。 5. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 6. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 4℃保存，有效期1年 【概述】 RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western和ELISA等。 RIPA的本意是Radio Immuno Precipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为高强度、中强度、低强度三类。请根据不同需求选择不同强度RIPA裂解液。 【使用建议】 如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。根据使用量，取每1ml RIPA加入10μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。 1. 样品前处理： a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。 b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。 c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。 2. 后处理：将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本产品长时间低温存放可能会出现沉淀，可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 3. 为保证最佳的使用效果，请尽量避免过多的反复冻融，可分装后使用。 4. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行，根据需要添加不同抑制剂。 5. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。 6. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【操作方法】 裂解贴壁细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 1. 小心地从细胞中去除培养基。 用冰冷的PBS清洗一次。 2. 将冰冷IP/Co-IP细胞裂解缓冲液添加到细胞板中（6孔板中每孔加入200-400μl），并在冰上孵育5分钟，中途不间断混匀。 3. 将裂解液转移至微量离心管中，以约13,000×g的速度离心10分钟，以在4°C下沉淀细胞碎片。 4. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 裂解悬浮细胞的方法（裂解前可加入相应蛋白酶/磷酸酶抑制剂）： 1. 将细胞悬液以1,000×g离心5分钟以沉淀细胞，丢弃上清液。 2. 用冰冷的PBS洗涤细胞一次，以1,000×g离心5分钟以沉淀细胞。 3. 将冰冷的IP/Co-IP细胞裂解缓冲液添加到细胞沉淀中。每50 mg湿细胞沉淀（10：1 v / w）使用500μl裂解缓冲液。 4. 在冰上孵育裂解物5分钟。通过在4°C下以〜13,000×g离心10分钟去除细胞碎片。 5. 将上清液转移到新的试管中，以测定蛋白浓度并进行进一步分析。 【注意事项】 1. 本品可用于蛋白纯化和各种免疫检测（如ELISA、Western印迹）。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20ºC保存，一年有效 【概述】 NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。本产品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。 【操作方法】 1. 对于培养细胞样品： a. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。b. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻涡旋或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。对于细菌或酵母：对于1ml菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻涡旋或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液，轻轻涡旋或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-4mg/ml，不同细胞有所不同。c. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。2. 对于组织样品：a. 把组织剪切成细小的碎片。b. 室温或37℃水浴完全融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。c. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)d. 用玻璃匀浆器匀浆或组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。e. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-25mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。f. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 3. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【概述】 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50×) (Protease and phosphatase inhibitor cocktail for general use, 50×) 是一种通用型用于细胞或组织蛋白提取的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物组合。本品含有AEBSF, Aprotinin, Bestatin,E64 , Leupeptin, sodium fluoride, sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate, sodium orthovanadate等。 本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂/氨基肽酶抑制剂，以及丝氨酸/苏氨酸、酪氨酸、酸性及碱性磷酸酶抑制剂。 【使用方法（仅供参考）】 1. 本蛋白酶磷酸酶抑制剂为50×的储存液，使用时按照1:50的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入20μl蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物)（1ml×2管磷酸酶抑制剂可以配套100ml裂解液使用），混匀后即可使用。含有蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 -20°C保存，有效期1年 【使用建议】 细胞或组织提取物等样品中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物等样品中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。 本产品为经优化和测试的用于常规细胞或组织蛋白提取等的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。主要由 Leupetin、Pepstatin A、Aprotinin、E-64 等组成。该混合物可以抑制绝大多数蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白 酶、木瓜蛋白酶等。该蛋白酶抑制剂混合液是100×的浓缩的DMSO溶液，适用于从哺乳动物组织、 细胞中提取蛋白质，能够更有效的获得目的蛋白质。提取出来的蛋白可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。 另配EDTA为单独包装，以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。 【使用建议】 1. 本蛋白酶抑制剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到如RIPA等裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)（若需加入EDTA也是1：100比例加入裂解液中），混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。 【注意事项】 1. 本品仅用于科研用途，不得用于临床或诊断相关研究； 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 常温保存，有效期1年 【概述】 分化作用是指组织染色后用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色和其他染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。 酸性乙醇分化液(1%)主要由稀酸、乙醇等组成，经常用于HE染色、Masson三色染色中，更适用于要求分化力轻微的组织，是一种非常重要的辅助试剂。 【使用建议】 苏木素染色或其他染色后的分化夜,分化时间约2-5s。分化后立即用水或蓝化液中止。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 常温保存，有效期1年 【概述】 分化作用是指组织染色后用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色和其他染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。 酸性乙醇分化液(0.5%)主要由稀酸、乙醇等组成，经常用于HE染色、Masson三色染色中，更适用于要求分化力轻微的组织，是一种非常重要的辅助试剂。 【使用建议】 苏木素染色或其他染色后的分化夜,分化时间约2-5s。分化后立即用水或蓝化液中止。 【注意事项】 1. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

【保存条件】 -20℃避光保存，有效期1年；4℃避光储存，有效期3个月。 【概述】 固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。固定液种类很多，常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。 多聚甲醛固定液是一种广泛用于免疫组化(IHC)、免疫荧光( IF)、免疫细胞化学(IC)、流式分析(FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。 本产品为16% 多聚甲醛PBS溶液(16% PFA)，主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成，该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定，是免疫组织化学和培养细胞的固定液之一，它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。其固定效果好、应用广，适用于各种常见细胞或组织的固定，对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果，但主要作用于蛋白质，无法固定尿酸和糖类等。 若需使用低浓度多聚甲醛，可使用PBS按比例稀释。 【使用建议】 4% 多聚甲醛固定液为常用组织细胞固定液，该操作步骤以4% 多聚甲醛固定液为例。如需使用浓度为16%的多聚甲醛固定液，该操作步骤仅供参考。 对于细胞样品，去除培养液后，按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例，加入4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品，加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可，但固定较长时间，例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织切片，加入4% 多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准，或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定，但切片较厚时可以固定较长时间，例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织块样品，浸泡入4% 多聚甲醛固定液中，室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时，除非组织块特别大，难以渗透。固定完成后，放入装有蒸馏水的离心管中清洗，每15-30分钟换一次水，共6-8次，建议在摇床进行，或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水，进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。 如将组织样品置于16% 多聚甲醛固定液中浸泡储存，请避光放置。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸，使溶液pH降低，从而影响染色。 4. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。 5. 多聚甲醛虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。 6. 多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中，固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留，因此后续实验结果如果受醛基影响，须尽量洗去残留的多聚甲醛。 7. 多聚甲醛固定液固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。 8. 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。

1％组织细胞固定液使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8097 1% Tissue Fixer （1% PFA） 500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 -20℃避光保存，有效期1年；4℃避光储存，有效期3个月。 【概述】 固定液可使细胞或组织的蛋白质凝固，终止内源性或外源性酶反应，防止组织自溶或异溶，以保持原有结构和形态。对免疫组化而言更有原位保存抗原的作用，避免抗原失活或弥散。固定液种类很多，常见的有多聚甲醛、甲醛、戊二醛、乙醇、丙酮等。 多聚甲醛固定液是一种广泛用于免疫组化(IHC)、免疫荧光( IF)、免疫细胞化学(IC)、流式分析(FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。 本产品为1% 多聚甲醛PBS溶液(1% PFA)，主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成，该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定，是免疫组织化学和培养细胞的固定液之一，它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。其固定效果好、应用广，适用于各种常见细胞或组织的固定，对皮肤、肌肉、内脏等均有良好的固定效果，但主要作用于蛋白质，无法固定尿酸和糖类等。 【使用建议】 对于细胞样品，去除培养液后，按照每六孔板一个孔加入1毫升固定液的比例，加入1%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品，加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定10-20分钟即可，但固定较长时间，例如1-2小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织切片，加入1% 多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准，或使用染色架进行固定。通常室温固定10-20分钟即可完成固定，但切片较厚时可以固定较长时间，例如1-2小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。 对于组织块样品，浸泡入1% 多聚甲醛固定液中，室温或4℃浸泡固定2到24小时。建议不超过8小时，除非组织块特别大，难以渗透。固定完成后，放入装有蒸馏水的离心管中清洗，每15-30分钟换一次水，共6-8次，建议在摇床进行，或用流水冲洗1-2小时。随后梯度脱水，进行包埋。如果暂时不包埋可放入70-75%的酒精中保存。 如将组织样品置于1% 多聚甲醛固定液中浸泡储存，请避光放置。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 本产品放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸，使溶液pH降低，从而影响染色。 4. 不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。 5. 多聚甲醛虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。 6. 多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中，固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留，因此后续实验结果如果受醛基影响，须尽量洗去残留的多聚甲醛。 7. 多聚甲醛固定液固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。 8. 醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。