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BCA蛋白浓度测定试剂盒-200T
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5001-200T(货期:现货)售价:¥190.00
BCA蛋白浓度测定试剂盒-200T
【保存条件】 室温避光保存,有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓度下限达到25µg/ml,最小检测蛋白量达到0.5µg,待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液: 依据样品数量,将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液,并充分混匀。 注:配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表: 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl,需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在2小时内测定,2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值(多孔则为平均OD)为纵坐标 c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度x=0.37mg/ml) 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同,得到OD有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。 3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶,可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为595nm。
苏木素伊红(HE)染色试剂盒(进口原料)-100ml
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5120-100ml×2(货期:现货)售价:¥340.00
苏木素伊红(HE)染色试剂盒(进口原料)-100ml
【保存条件】 室温避光保存,有效期1年 【概述】 苏木素染色(hematoxylin staining or haematoxylin staining),也被称作苏木精染色,是最常用的组织和细胞的染色方法之一。无色的苏木素(hematoxylin)氧化后形成有醌环结构(quinoid ring)的氧化苏木素(hematein or haematein),从而可以和三价的铝离子、铁离子等形成有颜色的带正电荷的复合物(如hematein-Al3+ complexes)。伊红(eosin)是一种化学合成的酸性染料,在水中解离成带负电荷的阴离子,可以和蛋白质氨基上带正电荷的阳离子结合,从而使细胞胞浆染成不同程度的红色或粉红色,与苏木素染色液染色形成的蓝色细胞核形成鲜明对比,从而使苏木素伊红(HE)染色成为病理组织切片中最广泛使用的一种常规染色方法。 本试剂盒使用试剂为优化后的Mayer法配方,苏木素伊红染色后细胞核呈现蓝色,细胞浆呈现粉红色或红色。 【使用方法(仅供参考)】 1.样品处理 a.对于石蜡切片: 二甲苯(自备)中脱蜡5-10分钟;换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟;无水乙醇浸泡5分钟;90%乙醇浸泡2分钟;80%乙醇浸泡2分钟;70%乙醇浸泡2分钟。蒸馏水洗涤2分钟。 b.对于冰冻切片: 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。 c.对于培养细胞: 固定液固定10分钟以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。 2.苏木素伊红(HE)染色 对于上述处理好的样品: a.苏木素染色液染色1-5分钟(可以根据染色结果和要求调整时间,根据组织大小和厚度进行调整)。 b.蒸馏水洗去浮色,用适当的返蓝液浸泡样品10-60s(亦可用自来水中冲洗去多余的染色液,约10分钟)。 c.蒸馏水再洗涤一遍(数秒钟)。 d.选做:根据不同分化液(自备)的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗10分钟。 e.伊红染色液染色30秒-2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 此时,如果需要直接观察,可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行,70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 3.脱水、透明、封片观察 70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟。换用新鲜的二甲苯,再透明5分钟。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察,细胞核呈蓝色,而细胞浆呈粉红色或红色。 【注意事项】 1. 染色后的分化为选做步骤,但分化后核质着色更清晰。 2. 染色液可以重复使用多次,认为效果不佳时再更换新的染色液。 3. 第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。 4. 伊红在水和梯度乙醇中会出现脱色,因此建议快速脱水。 5. 仅用于实验室,不适合农业/家庭/临床用途使用。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Gluta电镜固定液(2.5%戊二醛)-100ml
ECOTOP常用生化试剂货号:ED-8484-100ml(货期:现货)售价:¥150.00
Gluta电镜固定液(2.5%戊二醛)-100ml
【保存条件】 4℃避光保存,一年有效 【概述】 Gluta电镜固定液(2.5%戊二醛)常用于样本固定,固定速度快,对细胞核、细胞浆的细微结构固定效果好,经常用于电镜标本的固定。固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。 【操作方法】 1. 根据实验具体要求操作。 2. 取新鲜标本,立即加入Gluta电镜固定液(2.5%戊二醛) 溶液4℃固定1~4h,稍大标本应适当延长固定时间。 3. 送检或 4℃保存。 【注意事项】 1. 组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为 2~4mm,一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。 2. 固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。 3. 取出新鲜组织后,应及时固定。无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
潮霉素B  50mg/ml(无菌)-10ml
ECOTOP细胞培养试剂货号:ED-8418-10ml(货期:现货)售价:¥800.00
潮霉素B 50mg/ml(无菌)-10ml
【保存条件】 4℃保存,一年有效 【概述】 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素,可通过抑制蛋白质合成来对抗细菌,真菌和高级真核生物。潮霉素B最初是作为抗蠕虫药开发的,在研究实验室中主要用于选择和维持带有潮霉素抗性基因的细胞。 【操作方法】 1. 常用筛选浓度 注意:潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。 一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。 2. 杀灭曲线的建立 注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。 1)第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。 2)根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 终浓度(μg/mL) 培养基体积(ml) 5mg/ml潮霉素B加入体积(ml) 50 9.9 0.1 100 9.8 0.2 250 9.5 0.5 500 9.0 1.0 750 8.5 1.5 1000 8.0 2.0 3)第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。 3. 稳定转染细胞的筛选 1)转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。 注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%。 2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。 3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。 4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。 5)之后更换正常培养基培养即可。 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 本品为有毒化合物,避免与皮肤和眼睛接触,请小心操作。
5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
ECOTOP蛋白质/抗原/多肽/酶货号:ED-8522-10ml(货期:现货)售价:¥150.00
5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)-10ml
【保存条件】 建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。 上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。 【使用建议】 1. 室温或37℃水浴解冻5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液,并摇晃混匀。 2. 请按每40μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。 4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。 【效果图】 【注意事项】 1. DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 2. 该产品于-20℃保存时会出现SDS沉淀,使用前请确保溶液完全复溶混匀,有必要时可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 5. 一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。 6. 为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒-100T
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-6100-100T(货期:现货)售价:¥599.00
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒-100T
【保存条件】 -20℃保存,有效期1年 【使用建议(仅供参考)】 1. 准备溶液:室温融解试剂盒中的三种试剂,溶解后立即放置在冰上,混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I/II及细胞核蛋白抽提试剂 NE备用,在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂混合物及PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM(现配现用)。 A: 对于贴壁细胞:用PBS洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。(注:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。) B: 对于悬浮细胞:用预冷的PBS清洗一遍,离心收集细胞,尽最大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。 2. 每20µL细胞沉淀加入200µL添加了PMSF和蛋白酶抑制剂的细胞浆蛋白抽提试剂CE I。(对于200万HeLa细胞,其细胞沉淀的体积大约为20µL或40mg。) 3. 最高速剧烈涡旋5-10秒,把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长涡旋时间。) 4. 冰浴10-15分钟。(过程中可适当涡旋2-3次) 5. 加入细胞浆蛋白抽提试剂CE II 10µL。最高速剧烈涡旋5秒,冰浴1分钟。 6. 4℃下12,000-16,000g转速离心5分钟。 7. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存。(千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。每200万细胞用200µL本产品中的细胞浆蛋白抽提试剂CE I裂解后可获得的上清,其细胞浆蛋白浓度约为2-5mg/ml,不同细胞有所不同。) 8. 对于沉淀,完全吸尽残余的上清后,加入50µL添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂NE。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。若无法吸尽可使用PBS重悬高速离心后再吸弃上清进行裂解操作。) 9. 将沉淀重悬并在冰上孵育10分钟(过程中可适当涡旋3-5次)。 10. 4℃下12,000-16,000g转速离心10分钟。 12. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-80℃冻存。每200万细胞用50µL本产品中的细胞核蛋白抽提试剂裂解后获得的上清,其细胞核蛋白浓度约为1.2-3.0mg/ml,不同细胞有所不同。 另:新鲜组织细胞核与细胞质蛋白提取 ① 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂CE I和CE II(例如200µL细胞浆蛋白抽提试剂CE I中加入10µL抽提试剂CEII)。并加入PMSF至最终浓度为1mM配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200µL组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液(对于不超过30mg的组织样品,仅需加入100µL组织匀浆液),并在玻璃匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。 ② 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内,冰浴放置15分钟。 ③ 4℃条件下1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中,为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上清时千万不要触及沉淀。) ④ 对于沉淀,到了这一步已经充分匀浆,但很多细胞还没有破碎。接下去按照上一个细胞核质蛋白使用说明的步骤3开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,按照步骤3至步骤12抽提得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白(特别说明:对于起始量为30-60mg的组织样品,后续直接按照步骤3-12操作即可;对于起始量不超过30mg的组织样品,后续步骤3-12中的溶液的用量须减半使用)。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤13中抽提得到的细胞浆蛋白合并。新鲜的肝脏组织用本产品裂解后获得的上清,其细胞浆蛋白浓度约为3-10mg/ml,细胞核蛋白浓度约为3-10mg/ml,不同状态的不同组织有所不同。 【注意事项】 1. PMSF及蛋白酶抑制剂现配现用,配好后不能长时间储存。 2. 尽量减少反复冻融的次数,以免效率下降。
BCA蛋白浓度测定试剂盒-500T
ECOTOP常用生化试剂货号:EK-5001-500T(货期:现货)售价:¥390.00
BCA蛋白浓度测定试剂盒-500T
【保存条件】 室温避光保存,有效期1年 【概述】 BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成, 实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。灵敏度高,检测浓度下限达到25µg/ml,最小检测蛋白量达到0.5µg,待测样品体积为1-20µl。在50-2000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的 Tween20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT) 低于1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用本司生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。 【操作方法】 1.配制BCA工作液: 依据样品数量,将试剂A和试剂B按体积比50:1配制适量BCA工作液,并充分混匀。 注:配制BCA工作液前请将试剂A摇晃混匀,观察是否析出结晶,如若析出结晶,可37℃水浴促溶。 2.稀释蛋白标准品: 蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,如果蛋白样品所在溶液不含有干扰本试剂盒检测的物质,也可以用0.9%NaCl、PBS或水稀释标准品。蛋白标准液(5mg/ml BSA)如果冻存,请完全融化并混匀后使用。具体如下表: 编号 稀释液体积 蛋白标准液体积 最终浓度 A 70µl 5mg/ml BSA 30µl 1.5mg/ml B 30µl 从A管取60µl 1mg/ml C 20µl 从B管取60µl 0.75mg/ml D 30µl 从C管取60µl 0.5mg/ml E 60µl 从D管取60µl 0.25mg/ml F 60µl 从E管取60µl 0.125mg/ml G 60µl 0µl 0mg/ml 3.蛋白浓度的检测 a. 取5µl不同浓度蛋白标准加到96孔板的蛋白标准孔中。 b. 取5µl样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足5µl,需加标准品稀释液补足到5µl。请注意记录样品体积。 c. 各孔加入195µl BCA工作液。 37℃放置30分钟。 注:也可以室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温 度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或适当延长孵育时间。 d. 用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。可以立即测定吸光度,也可以在2小时内测定,2小时内检测数据无显著变化。 4.数据计算 a. 以不同浓度的蛋白标准液为横坐标 b. 以不同浓度的蛋白标准测得OD值(多孔则为平均OD)为纵坐标 c. 建立线性关系,获得公式(如右图中所示(本产品实际检测),若测得 样品OD=0.6则0.6=0.4995x+0.4151,计算得浓度x=0.37mg/ml) 【注意事项】 1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 不同96板的吸收值会有不同,得到OD有区别为正常现象(保证数据呈线性关系)。 3. 蛋白标准液(5mg/ml)收到后尽快分装,避免反复冻融。 4. BCA 试剂A在低温环境下会析出结晶,可适当37℃水浴促溶后使用。 5. 请使用96孔底部透明板(如普通细胞培养板)检测,最佳波长为595nm。

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