【保存条件】 室温（15-30℃）保存一年 【概述】 RNA holder是一种无毒的可直接使用的样品储存液，能迅速稳定组织，保护非冷冻细胞RNA于原位。可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNA holder保存液中，在室温可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃标本可以长期保存，RNA稳定存在不降解，取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。 【操作方法】 1. 根据要保存的各样本的体积，计算出所需 RNA holder用量。RNA holder的用量应当是组织体积的 10 倍（如 100mg 组织约用 1ml RNA holder）；离心收集 2×106细胞 RNA holder的用量是1ml。 2. 将 RNA holder按需要量分装入自备保存管中； 3. 快速将较大的组织切成任何一边最大厚度不大于0.5cm大小，然后将组织碎块放入到10倍体积的RNA holder中保存。注：组织过厚则RNA holder不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。 4. 保存时先将样本浸入RNA holder后置4℃冰箱过夜（使RNA holder完全渗入到组织中），然后转移至-20℃冰箱（RNA holder在-20℃仍为液态，有结晶析出为正常情况），或者过夜取出后直接转移至-80℃，可反复冻融20次不影响RNA质量。 【注意事项】 1. 组织和细胞取材要快速，防止RNA降解。冰冻组织不能用RNA holder保存，因其不能有效渗入冰冻组织中。 2. 保存样品的提取：组织样本从-20℃或-80℃取出后，复苏到室温后，取出组织块置于RNA提取液（如Trizol）中再行提取。细胞样本复温后低速离心收集细胞，去除RNA holder后，再加入RNA提取液提取RNA（细胞样本可直接在RNA holder中提取，需向混合物中加入10倍体积提取液如Trizol）。后续若需匀浆处理可直接在室温进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNA holder不影响后续提取质量。

【操作方法】 1. 样品处理： a. 组织：将组织在液氮中研磨，磨碎后及时于每50-100mg组织中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，样品体积不应超过RNAEx ZOL Reagent体积的10%（或使用匀浆仪器）。 b. 单层细胞：直接在培养皿中裂解细胞，如35mm直径的培养皿中加入1ml RNAEx ZOL Reagent，使用吸头吹匀促进细胞裂解。RNAEx ZOL Reagent的试剂量基于培养的表面积而不是细胞数量（每10cm2加入1ml RNAEx ZOL Reagent），RNAEx ZOL Reagent试剂量不足可能会导致分离出的RNA有DNA污染。 c. 悬浮细胞：先低速离心沉淀细胞，弃培养液后加入RNAEx ZOL Reagent（1ml RNAEx ZOL Reagent加入至5×106动物、植物、酵母或细菌细胞中）。加入RNAEx ZOL Reagent前避免洗涤细胞，这容易导致mRNA降解。一些酵母和细菌细胞的裂解可能需要使用均质器。 可选：一些样品可能需要额外的分享步骤，这些样品蛋白质、脂肪、多糖或细胞外基质含量高，如肌肉、脂肪组织、以及部分植物块茎。在根据上述方式处理后，于2-8°C，12000g离心10分钟，移除沉淀不溶物，RNA存于上清中。 2. 相分离 a. 将加完RNAEx ZOL Reagent后的样品在室温（15-30°C）静置5分钟，以利于样品核蛋白体完全分离 b. 按每1ml RNAEx ZOL Reagent加入0.2ml 氯仿（自备），小心盖好样品管后，剧烈震荡15秒，后置于室温（15-30°C）静置2-3分钟。 c. 2-8°C，10000g离心15分钟。离心后，混合物分离为下层（酚-氯仿相）、中间相以及上层无色水相。RNA存在于上层无色水相中，体积约为最初加入RNAEx ZOL Reagent体积的60%左右。 RNA分离提取步骤： 1. RNA沉淀 a. 将上述水相转移到一个新的管中，并保存有机相（若希望分离DNA或蛋白质）。混合异丙醇从水相中沉淀RNA，每1ml 用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent使用0.5ml 异丙醇，室温（15-30°C）静置10分钟。 b. 2-8°C，10000g离心10分钟。离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底会出现胶状沉淀即为RNA沉淀。 2. RNA洗涤 a. 弃上清。用75%乙醇洗涤RNA沉淀一次，每毫升用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent试剂使用至少1ml 75%乙醇，涡旋混匀后于2-8°C，不超过7500g离心5分钟，弃上清 3. 溶解RNAa. 在上述过程结束后，简单干燥RNA沉淀（空气干燥或真空干燥5-10分钟，不要真空离心离心干燥RNA）。重要的是不要让RNA沉淀过于干燥，这将大大降低其溶解度。加入25-200μl无RNase水或0.5% SDS，用吸头吹打几次至溶解，于50-60°C放置10分钟使RNA彻底溶解（注：若后续进行酶学实验，请勿使用0.5% SDS溶液溶解）。溶解后置于-80°C保存。 DNA分离提取步骤： 1. DNA沉淀 a. 样品加入氯仿分层后，移去上层水相提取RNA，吸取中间层和有机层的DNA用乙醇沉淀。每使用1ml RNAEx ZOL Reagent加入0.3ml 无水乙醇混匀，室温静置2-3分钟，2-8°C不超过2000g离心5分钟以沉淀DNA。 2. DNA洗涤 a. 移去苯酚-乙醇上清液（如需要，保存上清用于蛋白质分离，操作见下）。用0.1M的柠檬酸钠溶液（溶于10%乙醇的柠檬酸钠溶液）清洗沉淀的DNA。每毫升用于初始的RNAEx ZOL Reagent试剂添加1ml 溶液。每次清洗时，室温静置30分钟DNA沉淀（间歇混匀），2-8°C 2000g离心5分钟，弃上清。重复一次。 b. 用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每使用1ml RNAEx ZOL Reagent加入1.5-2ml 75%乙醇，室温放置10-20分钟（间歇混匀），2-8°C 2000g离心5分钟，弃上清。 c. 室温放置晾干DNA 5-15分钟，用8mM NaOH溶解DNA。从50-70mg组织或107细胞中分离的DNA溶于300-600μl 8mM的NaOH溶液中，浓度常为0.2-0.3μg/μl。 注：提取的DNA沉淀不易溶于水和Tris缓冲液中，建议用弱碱溶解，8mM NaOH的pH值为9，NaOH溶液溶解后可用TE、HEPES调节PH。从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状不溶物可用>12000g离心10分钟除去。 蛋白质分离操作步骤： 1. 蛋白质沉淀 a. 苯酚-乙醇上清液（每1ml RNAEx ZOL Reagent试剂上清体积约0.8ml）中加入异丙醇可沉淀出蛋白质。每毫升用于初始裂解RNAEx ZOL Reagent试剂中添加1.5ml 异丙醇，室温静置10分钟，然后2-8°C 12000g离心10分钟以沉淀蛋白质，弃上清。 2. 蛋白质洗涤 a. 用0.3M盐酸胍溶液（溶于95%乙醇）洗涤蛋白质沉淀3次。每毫升用于初始裂解的RNAEx ZOL Reagent试剂中添加2ml 0.3M盐酸胍溶液。每次洗涤中，室温静置20分钟，2-8°C 7500g离心5分钟，弃上清，重复3次。最后清洗后，加入2ml无水乙醇，漩涡混匀蛋白沉淀，室温静置20分钟，然后2-8°C 7500g离心5分钟以沉淀蛋白质，弃上清。 3. 蛋白质溶解 a. 干空干燥蛋白质沉淀5-10分钟，用1% SDS溶解蛋白质，反复吹打，50°C温浴至完全溶解，不溶物2-8°C 10000g离心10分钟去除。分离得到的蛋白质样品可用于WesternBlot或者-20°C保存（长期保存建议-80°C） 【注意事项】 1. RNA 酶污染注意事项： a. 提取过程用品均经过去RNA酶处理：玻璃制品可以150 °C烘烤4小时 ，塑料制品可浸泡于0.5M NaOH溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管 b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染RNA制备，且同时是RNA酶来源，同时RNAEx ZOL Reagent对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。 c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。 2. 安全性问题： a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应立即就医 3. 存储性问题： a. 实验已证明RNAEx ZOL Reagent室温下可稳定保存12个月，不过依然建议储存于2-8°C以保证最佳性能，尽量避光保存。

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 【操作方法】 I: 样品准备： 1. 取出血浆样品并置于冰上。如果样品是冷冻的，将样品在25-37°C的温度下水浴解冻直到完全变成液体，然后放在冰上直到下面操作开始。 2. 室温下以2000×g离心血浆样品20分钟以去除细胞和碎片。 3. 在不干扰沉淀的情况下将部分澄清的上清液血浆转移到新离心管中。 4. 在室温条件下将新离心管以 10,000×g 离心 20 分钟以去除杂质。 5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新管中，不要干扰沉淀，并将其置于冰上，直到准备好进行分离 6. 继续步骤“外泌体分离（用蛋白酶处理）”或“外泌体分离（无蛋白酶处理）”。 IIA:外泌体分离（用蛋白酶处理）： 建议使用蛋白酶 K处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低），若这与您的研究内容有冲突，可选择“分离外泌体（未经蛋白酶处理）操作步骤。 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 向样品中加入 0.05 倍体积的蛋白酶 K。例如：对于100µl起始体积的血浆，加入5µl蛋白酶 K 溶液。 4. 涡旋样品，将溶液试管置于37℃下孵育10分钟。 5. 加入 0.2 倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 6. 充分混合经蛋白酶 K处理的血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或倒置直到溶液均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 7. 将样品在 2-8°C下孵育30分钟。 8. 孵育后，将样品在室温下以10,000×g离心5分钟。（注意：对于小鼠血浆，在4°C下离心30分钟。） 9. 通过移液器吸出上清液并丢弃，此时外泌体包含在试管底部的颗粒中。 10. （可选步骤）再次以10,000×g转速离心试管30秒收集任何可能残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液。 11. 继续“外泌体重悬”步骤 IIB: 外泌体分离（无蛋白酶处理）： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入 0.5 倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 加入0.2倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 4. 充分混合血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或吹打直到溶液彻底均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 5. 将样品在室温下孵育10分钟。 6. 孵育后，将样品在室温下以10,000 × g离心5分钟 7. 通过移液器吸出上清液并丢弃，外泌体包含在试管底部的颗粒中。 8. （可选步骤）再次以 10,000×g 离心管 30 秒收集任何残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液 9. 继续“外泌体重悬”步骤 III: 外泌体重悬 1. 将 1×PBS 或类似缓冲液添加到颗粒中并上下涡旋或吸管以重悬外泌体。 起始血浆体积 重悬体积 100µl 25-50µl 1ml 100-500µl 2. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化 3. 提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存 【注意事项】 1. 血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃都会对产量有一定的影响。 2. 本品仅限用于科研实验

【保存条件】 4ºC保存，有效期1年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 【操作方法】 I: 样品准备： 1. 取出血浆样品并置于冰上。如果样品是冷冻的，将样品在25-37°C的温度下水浴解冻直到完全变成液体，然后放在冰上直到下面操作开始。 2. 室温下以2000×g离心血浆样品20分钟以去除细胞和碎片。 3. 在不干扰沉淀的情况下将部分澄清的上清液血浆转移到新离心管中。 4. 在室温条件下将新离心管以 10,000×g 离心 20 分钟以去除杂质。 5. 将含有澄清血浆的上清液转移到新管中，不要干扰沉淀，并将其置于冰上，直到准备好进行分离 6. 继续步骤“外泌体分离（用蛋白酶处理）”或“外泌体分离（无蛋白酶处理）”。 IIA:外泌体分离（用蛋白酶处理）： 建议使用蛋白酶 K处理以去除大部分血浆中蛋白质，但它可能导致部分暴露在外泌体表面的蛋白质降解（可能蛋白浓度会降低），若这与您的研究内容有冲突，可选择“分离外泌体（未经蛋白酶处理）操作步骤。 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 向样品中加入 0.05 倍体积的蛋白酶 K。例如：对于100µl起始体积的血浆，加入5µl蛋白酶 K 溶液。 4. 涡旋样品，将溶液试管置于37℃下孵育10分钟。 5. 加入 0.2 倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 6. 充分混合经蛋白酶 K处理的血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或倒置直到溶液均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 7. 将样品在 2-8°C下孵育30分钟。 8. 孵育后，将样品在室温下以10,000×g离心5分钟。（注意：对于小鼠血浆，在4°C下离心30分钟。） 9. 通过移液器吸出上清液并丢弃，此时外泌体包含在试管底部的颗粒中。 10. （可选步骤）再次以10,000×g转速离心试管30秒收集任何可能残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液。 11. 继续“外泌体重悬”步骤 IIB: 外泌体分离（无蛋白酶处理）： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入 0.5 倍体积1×PBS。 2. 将混合溶液彻底涡旋混匀。 3. 加入0.2倍体积（即总体积=血浆+PBS）的血浆外泌体提取试剂至上述溶液中。 总体积=血浆+PBS 血浆外泌体提取试剂 100µl+50µl 30µl 1ml+0.5ml 300µl 4. 充分混合血浆/血浆外泌体提取试剂混合物通过涡旋或吹打直到溶液彻底均匀。（注意：此时溶液应该会轻微混浊。） 5. 将样品在室温下孵育10分钟。 6. 孵育后，将样品在室温下以10,000 × g离心5分钟 7. 通过移液器吸出上清液并丢弃，外泌体包含在试管底部的颗粒中。 8. （可选步骤）再次以 10,000×g 离心管 30 秒收集任何残留试剂，小心吸弃任何残留的上清液 9. 继续“外泌体重悬”步骤 III: 外泌体重悬 1. 将 1×PBS 或类似缓冲液添加到颗粒中并上下涡旋或吸管以重悬外泌体。 起始血浆体积 重悬体积 100µl 25-50µl 1ml 100-500µl 2. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化 3. 提纯后的外泌体可在 2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存 【注意事项】 1. 血浆分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃都会对产量有一定的影响。 2. 本品仅限用于科研实验

【保存条件】 4ºC保存，有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离，但是目前使用的方法繁琐，非特异性且困难。ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子，从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分（即外泌体）从溶液中挤出，从而允许它们在短暂，低速离心后收集。 ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。•为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率• 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体• 避免耗时的超速离心• 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理： 1. 收集细胞培养基。 2. 以2000×g离心细胞培养基30分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中，注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积的ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂。如1ml上清液加入0.5ml提取试剂，或10ml上清液加入5ml提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的上清液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 25-100μl 10ml 100μl-1ml 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存，4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 4. 做少量WB实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离 外泌体做RNA或蛋白质分析，我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 6. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4ºC保存，有效期一年 【概述】 外泌体是含有复杂RNA和蛋白质的小囊泡（30-120 nm），所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外泌体被认为是细胞间的信使，在特定细胞之间传递其效应物或向大分子发出信号，然而它们的形成、组成以及涉及它们的生物学途径仍未完全了解。 外泌体功能和运输的生物学研究要求完整的外泌体的分离，但是目前使用的方法繁琐，非特异性且困难。ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂为从细胞培养基样品中浓缩完整外泌体提供了一种简单而可靠的方法。通过束缚水分子，从细胞培养基中分离总外泌体试剂可将溶解度较低的组分（即外泌体）从溶液中挤出，从而允许它们在短暂，低速离心后收集。 ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂可以从细胞培养基样品中快速高效地富集完整的外泌体。•为任何类型的下游应用最大限度地大大提高完整外泌体的回收率• 使用简单可靠的实验方案轻松分离外泌体• 避免耗时的超速离心• 灵活性极佳—可以根据样品量按比例增加或减少 【操作方法】 样品处理： 1. 收集细胞培养基。 2. 以2000×g离心细胞培养基30分钟使细胞和碎屑沉淀。 3. 将不含细胞的上清液转移至新管中，注意不要吸到管底的细胞及碎屑。 外泌体分离： 1. 从上一步分离的不含细胞的上清液中取所需体积至新管中，并加入0.5倍体积的ECOTOP细胞培养基上清外泌体提取试剂。如1ml上清液加入0.5ml提取试剂，或10ml上清液加入5ml提取试剂。 2. 将上清液与提取试剂吹打混匀或涡旋混匀。 3. 将混匀好的样品2-8℃过夜孵育。 4. 孵育完成后，在2-8℃条件下10000×g离心1小时。 5. 完成离心后，吸走并丢弃上清液，外泌体即包含在试管底部的沉淀中（大多数情况下是不可见的）。 6. 加入合适体积的1×PBS或其他类似缓冲液重悬沉淀。具体见下表： 开始实验时所使用的上清液体积 重悬所需缓冲液体积 1ml 25-100μl 10ml 100μl-1ml 7. 当沉淀重新悬浮之后，所得的外泌体即可进行下游分析或通过亲和层析进一步纯化。提纯后的外泌体可在2-8℃中保存1周或在小于-20℃中长期保存。 【注意事项】 1. 本试剂可室温保存，4℃保存也可。 2. 取上清注意避免吸入细胞或细胞碎片（重要！），合并相同的细胞培养液上清样品，装入无菌的玻璃瓶，可在4℃短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80℃。 3. 细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在 4℃和-80℃，都会对产量有一定的影响。 4. 做少量WB实验一般 1ml 细胞培养上清液或尿液样本基本足够，但为了足量分离 外泌体做RNA或蛋白质分析，我们推荐使用大于 10ml 样本量来分离 外泌体。 5. 分离外泌体可用于细胞功能研究或根据后续研究加入相应 Trizol或蛋白裂解液抽提 RNA或蛋白质或 1:100 PBS稀释行粒径检测； 6. 本品仅限用于科研实验。

【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 【概述】 Cell Counting Kit-8试剂盒简称CCK-8试剂盒，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。该试剂主要用途有：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。 【使用方法（仅供参考）】 1. 用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量。通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2×103个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5×103个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定，推荐进行预实验选择合适的细胞数量)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。 2. 每孔加入10μl CCK-8溶液（如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推）。可以用加了相应体积细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内（37°C）继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时即可。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的时间点用于后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。 5. 计算方法 细胞存活率 = [(As-Ab) / (Ac-Ab)]×100% 抑制率 = [(Ac-As) / (Ac-Ab)]×100% As：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质) Ac：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质) Ab：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8) 【注意事项】 1. 初次实验可选择3-5个孔进行预实验选择合适的细胞数量。 2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 3. 当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加OD值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小OD值；在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 4. 在做加药实验时，如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。 5. 如果测定的OD值太低可适当增加细胞数量或延长加入CCK-8溶液后的染色时间。 6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 7. 仅用于实验室，不适合农业/家庭/临床用途使用。 8. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 2-8℃保存，有效期1年 【概述】 台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit），是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色研制而成。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已死亡。 台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 本试剂盒足够检测100个细胞样品。 【使用建议（仅供参考）】 1. 收集细胞：对于贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化下细胞。对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清，用1毫升或根据细胞的量用适当细胞重悬液重新悬起细胞。 2.台盼蓝染色：吸取100微升重悬的细胞到一塑料离心管内，加入100微升台盼蓝染色液(2X)，轻轻混匀，染色3分钟(染色3分钟时间已经足够，染色时间可以更长一些，但不宜超过10分钟)。注：对于重悬于细胞培养液中的细胞，也可以直接加入等体积的台盼蓝染色液(2X)进行染色。 3.计数：吸取少量经过染色的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 本试剂盒提供的两种溶液都是无菌的，使用时最好在超净台内进行，避免细菌污染。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3. 本产品长时间存放可能会出现少量颗粒状沉淀，可在37ºC水浴约10分钟以充分溶解沉淀。沉淀完全溶解后即可正常使用。 4. 台盼蓝对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 5. 该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。