伊文思蓝染色液（0.5%）使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8435 Evans Blue Stain Solution 0.5% 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝，分子式C34H24N6Na4O14S4，分子量为960.80，CAS号为314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小和血浆白蛋白相近，而且在血液中和血浆白蛋白有很高的亲和力，因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障(BBB)的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。 伊文思蓝和台盼蓝都是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中0.5%为最常用的浓度。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色，因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞和活细胞，但无法区分死亡和坏死。 【使用建议】 (一)血脑屏障通透性 1. 取处理后的实验动物(以小鼠为例)，静脉注射Evans Blue Stain Solution(0.5%)数秒至1分钟，小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h后处死小鼠，取目的脑组织。 2. 脑组织置于1.5ml离心管中，加入1ml PBS， 迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆，离心。 3. 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室温孵育24h。 4. 1000g离心20～30 min或2000g离心15min。 5. 取上述溶液1～2ml，用分光光度计测620 nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。 (二)活细胞染色 1、取100μl重悬细胞到常规1.5ml或0.5ml离心管内，加入100μl 伊文思蓝染液轻轻混匀，染色3min(染色时间可适当延长，但不宜超过10min)。 2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，每个细胞样品至少数500个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率＝(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100% 【注意事项】 1. 伊文思蓝对人体有轻微毒性，请小心防护。 2. 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 3. 血脑屏障通透性实验中，伊文思蓝染色液注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 4. 最好采用低温冷冻离心机进行离心。 5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【保存条件】 4℃避光保存，有效期2年 【概述】 SafeView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型花青类核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，可与核酸结合后能产生很强的荧光信号。 【操作方法】 1. 琼脂糖凝胶中添加SafeView：根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每100ml胶液加入10µl SafeView (比例10000:1)。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后，用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)，就可以观察到明亮的核酸条带。 2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色：按照每100ml的100mM NaCl溶液或水中加入10µl SafeView，配制成染色工作液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的SafeView染色工作液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色20-30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察核酸条带。 【注意事项】 1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 2. SafeView相对EB毒性较小，但为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3M Sodium Acetate Solution, pH 5.2

Sodium Chloride Solution, 5mol/L，Sterilize

Sodium Chloride Solution, 1mol/L，Sterilize

2M氯化镁溶液使用说明书 【包装规格】 产品编号 产品名称 包装 ES-8361 Magnesium Chloride Solution, 2mol/L 100ml/500ml 使用说明书 1份 【保存条件】 室温保存，有效期1年 【概述】 2M氯化镁溶液由六水氯化锰镁和去离子水组成，该溶液经高温高压灭菌处理，可直接用于溶液的配制和细胞培养等方面。 【注意事项】 1. 仅限于科研使用，不可用于各种食品药品或临床治疗中。 2. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Potassium Chloride Solution, 3mol/L

Calcium Chloride Solution, 2.5mol/L, Sterilize

Calcium Chloride Solution, 1mol/L, Sterilize

【保存条件】 室温保存，有效期2年 【概述】 柠檬酸-柠檬酸钠抗原修复液是一种最常用的抗原修复液，可以用于多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的石蜡切片、冰冻切片的抗原修复。 细胞或组织多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联，遮蔽了样品的抗原位点，导致免疫染色时 染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果，这就需要对组织进行抗原修复。 通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色 效果，对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善，特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进 行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗 原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。 本产品特别适用于石蜡切片，也可以用于冰冻切片。 【使用建议】 实验前准备： 本产品为干粉，使用时用蒸馏水或去离子水溶解，定容至1L，如需必要，可使用盐酸调pH值至6.0。 抗原修复： 1. 高压蒸汽法 a. 抗原修复：压力锅中加入足以淹没切片的抗原修复液，加热至沸腾。 b. 将脱蜡至水的切片置染色架上，放入锅中，盖好锅盖，扣上压力阀加压，设置保压4 min。 c. 压力下降后打开锅盖，放置室温冷却，待溶液冷却至室温后取出切片。 d. PBS或TBS洗涤3次，每次5 min，随后即可进行后续的免疫染色步骤。 2. 蒸煮锅法 a. 将置于染色架上的切片放于抗原修复液中，95~100°C加热10~20 min。 b. 冷却至室温后取出，PBS或TBS洗涤3次，每次5 min，随后即可进行后续的免疫染色步骤。 3. 微波法 a. 向微波炉专用容器中加入抗原修复液，加热至沸腾。 b. 将脱蜡至水的切片置染色架上，放于容器中，煮沸10~20 min。 c. 冷却至室温后取出，PBS或TBS洗涤3次，每次5 min，随后即可进行后续的免疫染色步骤。 4. 对于其他切片 对于其它样品的抗原修复，可以参考石蜡切片的步骤进行。 【注意事项】 1. 抗原修复的时间为建议时间，请根据不同的样品、抗体和抗原自行摸索。 2. 抗原修复后，待溶液冷却至室温后再取出切片，使抗原表位在经历高温后复原。 3. 抗原修复液的加入量要足以淹没切片几厘米，防止在煮沸过程中切片变干。 4. 抗原修复过程需使用耐热染色架进行操作。 5. 试剂有潮解性，若有潮解请放心使用。 6. 为了您的安全与健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。